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【摘要】 目的 建立牛耳枫的质量鉴测指标。方法 采用薄层色谱鉴别，高效液相色谱法测定牛耳枫中芦丁的含量，高效液相色谱条件 Hypersil柱（4.6 mm×250 mm，10 μl），流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液（35∶65）。结果 高效液相法测定牛耳枫中芦丁，方法重现性好，准确可靠。结论 该方法可用于牛耳枫中芦丁的含量测定。
【关键词】 牛耳枫；芦丁；高效液相色谱；薄层色谱
1 仪器与试药
1.1 仪器 高效液相色谱仪：HP1100DAD检测器，十万分之一电子天平。论文学术科研网
1.2 试药 芦丁对照品：中国药品生物制品检定所，批号080-9303，牛耳枫：购于广州市药材公司，甲醇（色谱纯）：天津四友，硅胶G：青岛海洋化工厂。2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：依利特Hypersil C18（4.6×250 mm，10 μl），流动相为甲醇-0.4%磷酸（35∶65），流速为1 ml/min，检测波长为360 nm。
2.2 对照品溶液的制备 精密称芦丁对照品适量，置容量瓶中，加甲醇制成每1 ml含25 μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取牛耳枫药材粉末0.5 g，精密称定，加入乙醚50 ml，超声15 min，滤过，去弃乙醚液，药渣待挥干乙醚，药渣精密加甲醇50 ml，称定重量，水浴回流1 h，补足减失的甲醇重量，滤过，去弃初滤液，续滤液作供试品。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，注入色谱仪，测定，即得。
2.3 分离度试验 吸取芦丁对照品溶液、供试品溶液按上述方法测定，见图1、2。结果：样品中芦丁的分离度良好。
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2.4 标准曲线 取芦丁对照品溶液（0.016704 mg/ml），分别进样5 μl、10 μl、15 μl、20 μl，按试验方法项下的色谱条件测定其峰面积。以芦丁进样量（μg）为纵坐标，色谱峰的面积为横坐标，绘制标准曲线，结果表明，芦丁在0.0835～0.3341 μg的范围内，其进样量与色谱峰面积呈良好的线性关系。回归方程：Ｙ＝0.0007X+0.0029，相关系数r=0.9997。
2.5 稳定性试验 取样品按含量测定项下的色谱条件测定其峰面积，每隔2 h测1次，连续测4次，结果：样品在8 h内测定是稳定的，RSD=0.82%。
2.6 精密度试验 取对照品溶液（0.016704 mg/ml），分别等量10 μl进样5次，按上述实验方法项下的色谱条件测定，RSD=0.6%。
2.7 重现性试验 取样品一式5份，按含量试验项下的条件测定，计算芦丁积分面积，结果：RSD=2.1%。
2.8 回收率试验 取已测定含量（0.736 mg/g）的供试品约0.25 g，精密称定，再精密加入0.1739 mg芦丁对照品，按上述供试品溶液的制备方法制备和测定，一式5份，其结果见表1。表1 回收率试验结果表明：本测定方法的平均回收率为98%，基本符合要求。3 4批样品的含量 取样品分别按含量测定项下的方法分别测定，其结果见表2。表2 4批样品含量
4 讨论
牛耳枫中芦丁含量测定的流动相，还考察了流动相甲醇-水（35∶65）［2］、流动相甲醇-水-乙腈-冰乙酸（30∶57.5∶10∶2.5）［3］。采用流动相甲醇-水（35∶65），芦丁峰有少许拖尾。采用流动相甲醇-水-乙腈-冰乙酸（30∶57.5∶10∶2.5），芦丁峰分离效果较好，但要采用4种溶剂，成本也较高，而采用甲醇-0.4%磷酸溶液（35∶65），芦丁峰分离效果也好，且成本低、简便。
【参考文献】
1 黄泰康.常用中药成份与药理手册.北京：中国医药科技出版社，1994，1700.
2 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编（上册）.北京：人民卫生出版社，1988，897-898.
3 邓富良，陈本美.高效液相色谱法测定槐米中的芦丁含量.湖南医科大学学报，2006，25（6）:597-598