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【摘要】 目的 建立人血浆比阿培南(biapenem)浓度的反相高效液相色谱测定法(HPLC)。研究健康受试者单剂量和多剂量注射国产比阿培南后的人体药动学。方法 11名健康志愿者分别接受比阿培南注射液静脉滴注300mg单次和多次，应用反相高效液相色谱法测定血药浓度，计算药动学参数。结果 血浆中比阿培南浓度分别在0.5～10μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系，日内、日间变异系数及回收率均达到临床药动学研究的要求。受试者静注比阿培南单剂和多剂后体内过程均符合二房室模型，主要药动学参数cmax分别为(16.64±3.32)和(17.01±3.92)mg/L；平均AUC(0～∞)(27.28±8.94)和(26.85±7.46)［mg/(L?h)］，平均血浆消除半衰期t1/2β分别为(1.17±0.69)和(0.85±0.14)h。论文学术科研网结论 国产注射用比阿培南在健康人体内的药动学符合二房室模型特征；多次给药体内无蓄积作用。
【关键词】 比阿培南； 药动学； 高效液相色谱
ABSTRACT Objective To establish a HPLC method for determination of biapenem in human plasma and study the pharmacokinetics of parenteral biapenem in Chinese healthy volunteers. Methods The pharmacokinetics of a parenteral carbapenem antibiotic, biapenem, was studied in 11 healthy volunteers, following single intravenous dose and multiple doses (300mg). The drug concentrations in serum samples were assayed by high performance chromatography. The pharmacokinetic parameters were calculated by DAS2.0 Software.Results Serum concentrations ranged from 0.5 to 10mg/L were found in well linearity. The precisions of within??days and the recovery rate were all coincided with the study on the clinical pharmacokinetics. The pharmacokinetics of biapenem was fitted in a two??compartment open model, the mean peak concentrations (cmax) in serum was (16.64±3.32), (17.01±3.92)mg/L; the area under the concentration_timecurve (AUC) was (27.28±8.94), (26.85±7.46) ［mg/(L?h)］; and the elimination half??life (t1/2β) being (1.17±0.69), (0.85±0.13) h, respectively. Conclusion The pharmacokinetics of biapenem was fitted in a two??compartment open model and there was no accumulation after a multiple intravenous dose of biapenem in six days.
KEY WORDS Biapenem; Pharmacokinetics; HPLC
注射用比阿培南属于1β?布谆?碳青霉烯类抗生素药物，首先由日本Lederle公司和美国氰胺公司开发研制并于2002年3月在日本批准上市。比阿培南对革兰阳性菌、革兰阴性菌(包括耐药的铜绿假单胞菌)、厌氧菌等均具有较强的抗菌活性，对β?材邗０访肝榷ǎ?对肾脱氢肽酶的稳定性较亚胺培南强。与其它已上市的碳青霉烯类品种相比，比阿培南肾毒性很小，且无中枢神经系统毒性，不会诱发癫痫发作，能用于细菌性脑膜炎的治疗［1，2］。江苏正大天晴药业股份有限公司研制的注射用比阿培 培南(化学药品第3.1类)， 经国家食品药品监督管理局批准同意进行临床研究，临床研究批件号2005L02010。本试验的目的是通过对在健康志愿者中注射用比阿培南单次和多次给药药动学研究，了解药物在人体内吸收、分布、代谢、消除的规律，为该药制定合理给药方案提供依据。
1 材料与方法
1.1 药品与仪器
(1)试验药品 注射用比阿培南由江苏正大天晴药业股份有限公司提供，规格为每瓶300mg，批号20051018，避光保存；标准品由江苏正大天晴药业股份有限公司提供，批号20040801，含量99.7%。
(2)仪器设备 Agilent 1100LC高效液相色谱仪(包括G1314A VWD检测器和数据采集处理系统和G1312A二元泵)；高速离心机(美国Abbott公司)；电子分析天平。
(3)试剂 乙腈为高效液相色谱纯，乙酸铵、3?猜疬?丙磺酸(MOPS)和5?掺腔?吲哚乙酸(内标)均为分析纯。
1.2 给药方法与样品采集
(1)单次给药药动学研究 采取随机给药，11名健康志愿者于试验前一天入住I期病房，次日晨餐后接受单次静脉滴注比阿培南300mg，30min衡速滴完。于给药前、给药后0、10min、20min、0.5h、0.75h、1h，1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h和24h采集静脉血留取在肝素化的试管里，立即冷离心5min(1500×g)分离血浆，加同样量的MOPS(调pH7.0)混合。以上样本均立即冷却在甲醇?惨掖急?浴内，并贮于-80℃冰箱。
(2)多次给药药动学研究 11名受试者间隔一周后试验前一天入住I期病房，次日晨餐后接受单次静脉滴注比阿培南300mg，每12h给药次，连续给药5d，最后1日给药1次。试验前(用药前)；用药d2、3、4d、用药前0h；用药d5在用药前0h，用药后0h，10min、20min、30min、0.75h、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h、分别采集前臂静脉血。血浆处理同单次给药。
(3)观察给?后不良事件 进行各项生命体征、实验室及心电图检查，所有结果均填入记录报告表(CRF表)，以作安全性的评价。
1.3 生物样本测定方法
(1)色谱条件［3，4］ 色谱柱Zorbax eclipseXDB C18(150mm×4.6mm， μm)的分析柱(美国Agilent公司)，流动相为0.1mol/L乙酸铵缓冲混合物∶乙腈(98∶2.0)；检测波长300nm；流速1.0ml/min；进样量20μl；柱温28℃。
(2)样品处理 精密吸取血浆1ml置10ml具塞离心管中，加1mol/L MOPS(pH7.0)溶液1ml，加2ml 30%乙酸铵溶液(内含9.0μ/ml的内标)，涡旋混匀3min，13000r/min离心5min，转移上清液供HPLC分析。
(3)专属性 上述色谱条件下比阿培南有较大的色谱峰，与内标峰有较大的分离度，血浆中的杂质不干扰样品测定，比阿培南与内标的保留时间分别为4.1min和5.7min(图1～图3)。
(4)标准曲线的制备 精密配制浓度为0.5、1、2、5、8和10μg/ml系列比阿培南空白血浆液，各溶液含4.5μg/ml内标物。按“样品处理”项下操作及色谱分离，计算比阿培南与内标峰面积之比，以此为纵坐标， 血标准曲线范围为0.5～10μg/ml，定量下限约为0.5μg/ml。
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(5)回收率的测定 取空白血浆加入比阿培南样品，使成为高、中、低三种不同的浓度(1、5和8μg/ml)的样品，按血浆样品处理后进行测定，计算比阿培南与内标的色谱峰面积比(As??r)。另分别取相当于比阿培南为1、5和8μg/ml标准液各5份，计算比阿培南与内标的色谱峰面积比(Ar??r)。对上述As??r、Ar??r按As??r/Ar??r×100%计算，即得血浆样品处理方法的提取回收率(%)，结果显示高、中、低三种浓度的平均回收率均>95%。同样操作，在一个分析批内测定多次，计算日内精密度；在不同天连续制备并测定三个分析批，计算日间精密度。测定结果表明血浆样品分析的精密度良好，RSD均<10%(表1)。表1 比阿培南血浆样品回收率试验及精密度 (6)稳定性试验 配制浓度为1、5和8μg/ml的质控样品各5份，其中1份各浓度水平置24h再进样分析，结果表明，样品在室温放置24h内稳定；1份在4℃放置24h再进样分析，结
果表明，样品在4℃条件下放置24h内稳定；另外3份置-20℃冰箱中保存，分别在0、20和40d室温解冻后测定比阿培南浓度，结果表明样品在-20℃放置40d内稳定。
(7)随行标准曲线和质控样品的测定 按标准曲线测定方法配制标准样品，并进行色谱分析和试验四周期随行标准曲线及质控样品数据符合药典规定的生物样品分析测定要求。
(8)数据处理 试验数据经DAS2.0处理求得药动学参数，计算过程按最佳拟合选择模型，并计算每个参数的均数及标准差。峰浓度(cmax)，平均血浆消除半衰期(t1/2β)取实测值，用矩行法计算曲线下面积［5］。
2 结果
2.1 血药浓度?彩奔淝?线
11名健康志愿者单次和多次静脉注射300mg比阿培南后的平均血药浓度?彩奔淝?线图4和图5。
2.2 药动学参数
健康志愿者单次和多次静脉注射300mg比阿培南后，用HPLC测定各时间点血浆中比阿培南的平均浓度，获得数据经DAS2.0处理求得药动学参数，计算过程按最佳拟合选择模型，实验数据符合二房室开放模型(表2)。
3 讨论
注射用比阿培南是1β?布谆?碳青霉烯类抗生素具有抗菌谱广、抗菌活性强的特点。本品抑制铜绿假单胞菌和厌氧菌的活性比亚胺培南强2～4倍，抑制耐药铜绿假单胞菌活性比美罗培南强4～8倍，对不动杆菌、厌氧菌等比头孢他啶有效［2］。11名受试者静脉滴注比阿培南后的血药浓度?彩奔淝?线符合二房室开放模型，实测血药浓度?彩奔淝?线与理论曲线基本重合(相关性、拟合优度均佳)。药物静脉滴注30min达峰值，稳态表观分布容积大说明该药在体内分布较广，体内消除半衰期短。本文所得药动学参数与国外文献报道基表2 11名健康志愿者单次和多次静脉注射300mg比阿培南后的主要药动学参数本一致［3，4，6］，但cmax稍低。Nakashima等［7］报道青年健康志愿者静脉滴注300mg比阿培南后cmax为18.9mg/L，而本实验测得单次为(16.635±3.323)mg/L，多次为(17.01±3.916)mg/L，可能是因为用药的方法及静脉滴注时间不同，药物的理化特性，如水溶性、晶型、颗粒大小等，都可以影响药物吸收。另外，人种的差异对药物体内过程也可能有一定影响。
本实验显示国产注射用比阿培南安全性好，血中浓度高，体内分布较广，体内消除半衰期短，多次用药不会产生药物的蓄积。按照实验所得的人体药动学特征，每日两次给药可满足临床用药的需要。
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［7］ Nakashima M, Uematsu T, Ueno K, et al. Phase I study of L??627, biapenem, a new parenteral carbapenem antibiotic ［J］. Int J Clin Pharmacol Ther Toxicol,1993,31(2):70～76.