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作者：刘元慧 王晓明 王德兴 袁珂
【摘要】 目的比较厚朴饮片的不同加工工艺。方法采用高效液相色谱法，以厚朴酚、和厚朴酚的含量为考察指标，通过正交实验比较姜制厚朴的不同炮制工艺。结果姜炒法的最佳工艺为A1B2C2，即用10%的姜汁闷润2 h在120℃下炒干；姜蒸法的最佳工艺为A2B2C2， 即用10％的姜汁闷润2 h后再蒸制3 h，蒸制温度100℃。结论两种工艺方法相比，姜炒法制得的厚朴饮片有效成分的保留量相对较高。该研究为制定厚朴饮片合理、规范的加工工艺及质量标准提供了参考依据。论文学术科研网
【关键词】 厚朴 炮制工艺 正交实验 厚朴酚 和厚朴酚 高效液相色谱法
厚朴为木兰科植物厚朴Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹叶厚朴Magnolia officinalis Rehd. et Wils.var. biloba Rehd. et Wils.的干燥干皮、枝皮或根皮［1］。厚朴属重要的传统中药，具有抗菌、消炎、抗胃溃疡、抗氧化等作用［2］。厚朴中的主要成分厚朴酚与和厚朴酚为联苯型木脂素类［3］，以游离态与植物胶、树脂等脂溶性成分共存。厚朴的炮制方法很多，历代炮制方法就有十余种［4］， 姜制为常用炮制方法， 但工艺尚不统一，导致质量差异较大［5，6］。本研究根据《中国药典》2005 版Ⅰ部的规定，对姜制厚朴的最佳炮制工艺条件进行了初步探讨。利用L4(23)正交设计实验，采用高效液相色谱法，以厚朴酚、和厚朴酚的含量为考察指标，通过正交实验比较姜炒与姜蒸厚朴的不同炮制工艺，找出合理的炮制方法，以达到改进厚朴饮片炮制工艺的目的。现报道如下。
1 仪器与试药
Waters 515型高效液相色谱仪（美国Waters 公司）；Waters 2487双波长检测器（美国Waters 公司）；英谱2000HS工作站；KQ-250B超声波提取器（昆山市超声仪器有限公司）； Millipore Simplicity型超纯水器（美国Millipore公司）；RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；101-1型电热恒温干燥箱；微量分析天平（EETTLER AE 240瑞士）。
厚朴药材于2007-04采自浙江丽水，经浙江林学院斯金平教授鉴定为木兰科凹叶厚朴，样品保存于本实验室；对照品厚朴酚（110729-200310）与和厚朴酚（110730-200307）购自中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯试剂，水为超纯水，其他试剂均为分析纯，流动相均经0.45 μm微孔滤膜滤过。
2 方法和结果
2.1 色谱条件Symmetry C18色谱柱(3.9 mm×150 mm, 5 μm)，流动相为甲醇-水(78∶22)；流速1. 0 ml? min-1；检测波长295 nm；柱温25℃；灵敏度0.2AUFS，理论塔板数大于3 000。
2.2 含量测定方法的建立
2.2.1 对照品及供试品溶液的制备 精密称取厚朴酚与和厚朴酚对照品加甲醇分别配成浓度为40.3 μg ? ml-1和 6.04 μg ? ml-1溶液，经0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液作为对照品溶液。
2.2.2 线性关系考察 精密量取各对照品溶液，分别进样2,4,6,8,10 μl，按照“2.1”项下的色谱条件测定。以对照品质量X（μg）为横坐标，峰面积Y为纵坐标进行线性回归，计算厚朴酚的回归方程：Y = 2.56×10-8X-3.6×10-4, r = 0. 999 8；和厚朴酚的回归方程：Y = 2.83×10-8X+1.78×10-3， r =0. 999 8。结果表明厚朴酚在4.03～20.15 μg，和厚朴酚在0.604～3.020 μg范围内呈良好的线性关系。
2.2.3 稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4 h进样10 μl，以峰面积值为指标计算RSD，考察供试品溶液的稳定性。结果厚朴酚、和厚朴酚的RSD分别为1.32%和2.08% 。表明供试品溶液在4 h内稳定。
2.2.4 精密度实验 分别取对照品溶液，精密进样10 μl，连续进样5次，测定峰面积。结果厚朴酚、和厚朴酚的RSD分别为1.48%和1.69%。表明仪器精密度良好。
2.2.5 样品测定 将厚朴生品置40 ℃烘箱中干燥至恒重，粉碎成粗粉。精密称取待测样品18份，每份约20.0 g，按正交实验表中所选取的因素水平分别进行加工炮制。将炮制 制后的饮片与炮制前的生品分别置50 ℃烘箱中干燥至恒重，粉碎过100目筛。精密称取待测样品约3.0 g，按照“2.2.1” 项下供试品溶液的制备方法制备并进样10 μl，记录峰面积，计算厚朴酚与和厚朴酚的含量。对照品及样品的色谱图见图1。
a-厚朴酚对照品 b-和厚朴酚对照品 c-厚朴姜炒品 d-厚朴姜蒸品
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图1 对照品及样品色谱图
2.3 正交设计选用L4(23)正交方案，以厚朴酚与和厚朴酚的含量为考察指标，采用姜制法中的姜炒法及姜蒸法。姜炒法中选用姜汁比例、闷润时间、炒制温度3个因素；姜蒸法中均采用10％的姜汁，选用闷润时间、蒸制时间、蒸制温度，每个因素2个水平进行实验，正交实验的两个评价指标，采用权重系数分别为0.5的综合评分进行数据分析，以优选出最佳炮制工艺。结果见表1～2。
由表1可以看出，3因素的主次顺序为C>B>A，最佳组合为A1B2C2，即姜汁比例10%，闷润时间2 h，炒制温度120℃；由表2看出，3因素主次顺序为B>C>A?最佳组合为A2B2C2，即采用10％的姜汁闷润2 h，蒸制时间为3 h，蒸制温度100℃。
3 讨论
以上实验结果表明，厚朴的姜炒法中厚朴酚与和厚朴酚的总量有所提高，姜制品符合《中国药典》厚朴酚及和厚朴酚总量不低于2.0%的要求。与姜炒法相比，姜蒸法中厚朴酚与和厚朴酚的总量偏低，因此两法相比，最佳炮制方法是姜炒法。姜炒法的操作相对简单，在厚朴的炮制中应优选姜炒法。 表1 姜炒法L4(23)正交实验表2 姜蒸法L4(23)正交实验
提取溶媒及提取方法的的选择：进行含量测定时，提取溶媒选择95 %乙醇， 40 %，60 %，80 %，100 %甲醇进行比较，通过HPLC法测定在不同溶媒条件下提取所得提取物中厚朴酚的含量，结果表明采用100%甲醇作溶媒提取厚朴酚的含量最高，故选用甲醇为提取溶媒。
以甲醇为溶剂，分别采用超声提取30 min ；超声提取0.5 h ；超声提取1 h，通过HPLC法测定不同提取时间所得提取物中厚朴酚的含量，结果表明采用超声提取0.5 h基本能将有效成分提取完全，故选用此法。
两种工艺方法相比，姜炒法制得的厚朴饮片有效成分的保留量相对较高。该研究为制定厚朴饮片合理、规范的加工工艺及质量标准提供了参考依据。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］. 北京：化学工业出版社，2000: 205.
［2］ 李杰萍, 梁 统, 周克元, 等. 厚朴酚对趋化三肽激活的大鼠中性粒细胞功能的影响［J］. 中国药科大学学报, 2003, 34(3) : 260.
［3］ 黄文华, 郭宝林, 斯金平. 不同种源厚朴酚性成分的HPLC图谱研究［J］. 中国中药杂志,2005,30(13):968.
［4］ 焦念风, 蒋纪洋. 厚朴古今炮制研究概况［J］. 时珍国医国药,2002,13(4):241.
［5］ 郭丽冰, 赵丽华. HPLC 测定不同来源姜制厚朴中厚朴酚及和厚朴酚的含量［J］.中国现代中药, 2006, 8( 9) : 17.
［6］ 李水福, 潘 莉, 吴俊娇. 市场厚朴的质量急待重视［J］. 现代中药研究与实践, 2006, 20( 6) : 24