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【摘要】 目的研究肠胃宁胶囊的质量标准。方法建立黄芩、甘草、白芍的薄层色谱鉴别方法，建立黄芩苷的高效液相色谱含量测定方法，流动相为甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2），紫外检测器，检测波长为315 nm，流速为1 ml?min-1，理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2 500。结果薄层色谱中能检出黄芩、甘草、白芍，薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰；黄芩苷在100 ～ 2 500 ng范围内线性关系良好，回归方程为 lgy = 0.933 2 lgx-2.864 1，r=0.999 2，平均加样回收率为99.28％，RSD为1.77％（n=5）。 结论方法简便，可控，适用于肠胃宁胶囊的质量控制。
【关键词】 肠胃宁胶囊 质量标准 薄层色谱 高效液相色谱 黄芩苷
Abstract：ObjectiveTo study the quality standards for Changweining Capsules.MethodsThe TLC methods for identification of Radix Scutellariae, Radix Glycyrrhizae, Radix Paeoniae Alba were established. A simple HPLC was established for the determination of baicalin. The mobile phase was methanol-water-phosphoric acid (45∶55∶0.2). ResultsRadix Scutellariae, Radix Glycyrrhizae, Radix Paeoniae Alba could be detected. The blackspots were clear on the thin-layer chromatography and the negative sample was no interference. Baicalin showed a linear relationship within the concentration range of 100 ～ 2500 ng, r=0.999 2. The average recovery was 99.28% and RSD was 1.77% (n=5).ConclusionThe method is suitable for the quality control of Changweining Capsules.
Key words：Changweining； Quality standards； TLC； HPLC； Baicalin 肠胃宁胶囊是河北医科大学正在研究开发的五类新药，由黄芩、甘草（炙）、白芍等药组成，具有清热止痢、缓急止痛之功效，对于治疗肠炎、痢疾、腹泻等疾病有较好的疗效，现已申报国家专利。论文学术科研网为更好地控制该产品的内在质量，本实验对肠胃宁胶囊中黄芩、甘草、白芍3味药材进行薄层色谱鉴别，并采用高效液相色谱法对方中君药黄芩中活性成分黄芩苷进行测定，为该制剂建立完善的质量标准提供依据。
1 仪器与试药 LC100液相色谱仪系列（美国Perkin-Elimer 公司）；Agilent hc-C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）； BS223S电子天平（德国Sartorius公司）；λ-2紫外分光光度仪（美国Perkin-Elemer公司）；KQ-250E超声波清洗器（昆州市超声仪器有限公司）；PWUV超纯水机（上海力康发展有限公司）。 黄芩苷（批号：110715-200212），芍药苷（批号：110736-200220），黄芩对照药材（批号：120955-200305），白芍对照药材（批号：120905-200106），甘草对照药材（批号：120904-200410），均购自中国药品生物制品检定所；甘草酸（Sigma公司）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。肠胃宁胶囊：自制。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 黄芩的鉴别取本品和阴性样品各1 g，加甲醇20 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml，用水饱和正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗涤3次，20 ml/次，弃去水洗液，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液和阴性溶液。另取黄芩对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每毫升 升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液, 置紫外灯（365 nm）下检视见图1。可见供试品溶液色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，有相同颜色斑点，而阴性样品无此斑点。
2.1.2 甘草的鉴别取甘草阴性样品和对照药材各1 g，按“2.1.1”项下的供试品溶液制备方法制备，作为甘草阴性溶液和对照药材溶液。另取甘草酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取“2.1.1”项下的供试品溶液和甘草阴性溶液及对照药材溶液、对照品溶液各5 μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上。以正丁醇-醋酸-乙醇-水（6∶1∶1∶4）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（254 nm）下检视见图2。可见供试品溶液色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，有相同颜色斑点，而阴性样品无此斑点。
2.1.3 白芍的鉴别取本品和阴性样品各1 g，加乙醇20 ml,超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml溶解，用乙醚萃取2次，20 ml/次，弃去乙醚液，水层用水饱和的正丁醇萃取3次，20 ml/次，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗涤3次，15 ml/次，分取正丁醇层，蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液和阴性溶液。另取白芍对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-浓氨试液（8∶1∶3∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃烘约5 min，日光下检视见图3。可见供试品溶液色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，有相同颜色斑点，而阴性样品无此斑点。
图1 肠胃宁胶囊中黄芩的薄层色谱图（略）
图2 肠胃宁胶囊中甘草的薄层色谱图（略）
图3 肠胃宁胶囊中白芍的薄层色谱图（略） 2.2 含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取真空干燥至恒重的黄芩苷对照品适量，加无水乙醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备取本品内容物，研细(过3号筛)，取细粉0.85 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加无水乙醇约20 ml，超声提取20 min，取出，放冷，加无水乙醇至刻度，摇匀；精密吸取该溶液1 ml置50 ml容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。
2.2.3 检测波长的选择取黄芩苷对照品适量，用无水乙醇溶解，制成溶液，在190～800 nm 进行了光谱扫描，结果表明黄芩苷无水乙醇溶液在315 nm 左右有最大吸收，因此选择315 nm作为测定的吸收波长。
2.2.4 色谱条件色谱柱为Agilent hc-C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）；流速1 ml?min-1；检测波长315 nm；柱温40 ℃；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2 500。
2.2.5 阴性实验按照本品的处方、制法制备缺少黄芩的阴性样品，精密称取0.5 g，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。将黄芩苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液分别注入高效液相色谱仪中，进行测定，得到色谱扫描图，见图4。可见供试品与对照品溶液在相应的位置上有相似的峰，而阴性对照则无明显其它峰出现。
学术科研网 2.2.6 标准曲线的制备精密称取黄芩苷对照品4.98 mg，置50 ml量瓶中，加无水乙醇适量溶解并加至刻度,摇匀，得0.099 6 mg/ml黄芩苷对照品溶液。分别取1，5，10，15，18，20，25 μl进样测定，记录峰面积。以进样量(ng) 的对数(lgy)及对峰面积的对数(lgx)及进行线性回归，得回归方程为：lgy=0.933 2 lgx-2.864 1，r=0.999 2。结果表明，黄芩苷在100～2 500 ng范围内进样量与峰面积线性关系较好。结果见图4。
图4 黄芩苷对照品（a）、肠胃宁胶囊（b）、阴性对照（c）的HPLC图谱（略）
2.2.7 精密度实验吸取对照品溶液及供试品溶液，各进样5次，10 μl/次，检测结果得对照品的RSD值为0.23%，样品的RSD值为0.93%，表明仪器的精密度良 好。
2.2.8 稳定性实验取批号060628样品制备供试品溶液，放置0，2，4，8，12 h，分别精密量取10 μl进样，测定中黄芩苷的峰面积，计算得其RSD为1.10%，说明供试品溶液在制备后12 h内稳定。
2.2.9 重复性实验取批号060628的样品5份，精密称定， 分别制备供试品溶液，进样测定，计算得黄芩苷的平均含量为182.36 mg / g，RSD为2.00%，表明方法的重复性良好。
2.2.10 加样回收实验取批号060628的样品适量，共5份，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别准确加入10 ml 0.099 6 mg／ml黄芩苷对照品溶液，制备供试品溶液，进样测定，计算得平均回收率为99.28%，RSD=1.77%。
2.2.11 样品测定取6批样品，制备供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，采用外标法计算黄芩苷的质量分数，结果见表1。考虑到所购药材中黄芩苷的差异，故将样品中定量限度定为本品每片以黄芩苷计不得少于60 mg。
表1 肠胃宁胶囊中黄芩苷的测定结果（略）
表中数据为每粒中含量
3 讨论 按本品处方比例及制备工艺分别制备的不含黄芩、甘草、白芍的缺味样品并制成阴性对照溶液，将它们分别与相应的供试品同板进行薄层色谱实验。结果表明各阴性对照均无相应斑点，该3味药的鉴别方法具有专属性。 含黄芩复方制剂中黄芩苷的测定方法已报道的有紫外分光光度法［1，2］、近红外光谱法［3］、毛细管电泳法［4］、高效液相色谱法［5，6］。紫外分光光度法、近红外光谱法操作较繁琐，且影响结果的因素较多；毛细管电泳法虽然高效、简便，但灵敏度较差、线性范围较窄；因此选用高效液相色谱法对该样品中黄芩苷进行测定。经比较，采用甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）为流动相，检测波长为315 nm，柱温为40 ℃时，能使峰得到较好分离，且基线稳定。 测定黄芩苷时，供试品的提取方法进行了索氏提取、超声、热回流3种提取方式比较，结果采用超声法提取得到的样品中黄芩苷的量比索氏提取和热回流得到的都高，提取更完全，并且方法简便、节省时间，故选择超声作为提取方法。采用超声处理的方法，比较了甲醇、乙醇、75%乙醇对样品中黄芩苷提取效果的影响，结果以乙醇所得提取率最高，因此选择乙醇为提取溶剂。采用乙醇超声提取，分别比较了提取5，10，20，30 min时样品中黄芩苷的量，结果提取20 min得到的黄芩苷的量较高，故采用超声提取20 min方法。
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