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作者：赵荣华 赵声兰 毛晓健 解奉江 刘珍珍
【摘要】 目的探讨何首乌高温清蒸后泻下成分与泻下作用的关系，为制订制何首乌的质量标准提供依据。 方法用紫外分光光度法测定何首乌中两种饮片规格（块0.8～1 cm,厚片2～4 mm）蒸制过程中的结合型蒽醌含量,观察小鼠服用两种规格制何首乌饮片的泻下作用。 结果何首乌块（0.8～1 cm）清蒸6 h无泻下作用，结合型蒽醌含量为2.09 mg/g；何首乌厚片（2～4 mm）清蒸4 h无泻下作用，结合型蒽醌含量为2.0 mg/g。结论 何首乌高压蒸制后无泻下作用，结合型蒽醌含量明显降低，可考虑将结合型蒽醌含量作为制何首乌的限定指标。
【关键词】 何首乌 结合型蒽醌 泻下作用
何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根。论文论文参考网何首乌生用具有润肠通便的作用，制后有补肝肾、强筋骨、乌须发的作用。何首乌炮制的关键是降低结合型蒽醌的含量，去除泻下的副作用。目前《中国药典》2005年版［1］制何首乌项下仅有二苯乙烯苷的含量测定，而没有结合型蒽醌的含量限定，研究何首乌块(长宽高在0.8～1 cm之间,以下同)和厚片(厚度在2～4 mm之间,以下同) 蒸制后结合型蒽醌含量与泻下作用的关系，可以为制订制何首乌质量标准提供科学依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器7520型可见-紫外分光光度计（上海分析仪器厂）。
1.2 药品与试剂对照品大黄素由中国药品生物制品检定所提供（批号0756-200110，含量测定用），所用氯仿、甲醇、硫酸、乙酸镁等试剂均为分析纯试剂，水用纯净水。显色剂用1%乙酸镁甲醇溶液。何首乌药材样品来自云南省绿劝县，经云南中医学院中药鉴定教研室廖心荣教授鉴定为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的块根，人工切成两种大小不同的规格：块0.8～1 cm，厚片2～4 mm。
1.3 动物 昆明种小鼠，18～22 g，购自昆明医学院，雄雌各半。
2 方法与结果
2.1 样品的制备取何首乌块9份，每份200 g，每份用200 ml水浸润，润透后放入高压锅中的竹皿中，120℃蒸制，蒸制时间分别为0.5，1，2，3，4，6，8，10，12 h；取何首乌厚片5份，每份200 g，每份用200 ml水浸润，润透后，放入高压锅中的竹皿中，120℃蒸制，蒸制时间分别为 2，3，4，5，6 h，每一个温度段有3份样品，蒸好后置电热鼓风干燥箱中80℃干燥，至干，含水量为10%，备用。
2.2 受试药物的提取分别取生首乌、 0.8～1 cm块状何首乌清蒸0.5，1，2，3，4，6，8，10 h和2～4 mm厚片何首乌清蒸2，3，4，5，6 h的炮制品各10 g，加入索氏提取器中用甲醇提取12 h，回收甲醇后加纯水溶解至8 ml备用。
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2.3 结合型蒽醌含量的测定
2.3.1 对照品溶液的制备准确称取大黄素对照品10.40 mg，用甲醇溶解并定容于10 ml容量瓶中，即得浓度为1.04 mg/ml的储备液。取3.00 ml储备液，以甲醇定容于100 ml容量瓶中，即为31.2 μg/ml的对照品溶液。
2.3.2 标准曲线的绘制参照文献［2］乙酸镁显色比色法，选定最大吸收波长为512 nm，样品在显色后15～60 min内吸收度稳定，因而选择在显色15 min后测定。分别吸取大黄素对照溶液2 ml，平行显色后测定，吸光度值RSD = 0.5%（n=5）。分别准确吸取大黄素对照品溶液0.5，1.0 ，3.0，5.0，6.0 ml置于10 ml容量瓶中，各加2.5 ml醋酯镁显色剂，再用甲醇定容并混匀显色。显色后15 min，以显色液为空白，于512 nm处分别测定其吸光度（A），数据回归处理，得回归方程为：A = 41.1 C + 0.009 052，r =0.999 2（n=5），C=mg/ml。
2.3.3 样品溶液的制备精确称取样品约1 g(过60目筛)，置索氏提取器中，加入100 ml氯仿，在沸水浴上回流2 h，经检查游离蒽醌提尽后，回收氯仿液，药渣以100 ml甲醇继续于沸水浴上回流提取结合型蒽醌，约2 h经检查结合型蒽醌提尽后，回收甲醇液，然后加入15%的硫酸溶液40 ml氯仿30 ml，于沸水浴上回流水解约4 h，经检查水解完毕后，水解液置分液漏斗分取氯仿层，上层水相用45 ml氯仿分2次萃取。合并氯仿液，适量纯净水返洗pH至6 6左右，回收氯仿，残留物用甲醇溶解，转移至10 ml容量瓶中，并用甲醇定容至10 ml，作为结合型蒽醌的供试品溶液。
2.3.4 重复性实验分别精确称取同一样品5份，按上述方法制备供试品溶液，并测定含量，结果显示游离蒽醌含量（mg/g）的RSD=2.85%；结合型蒽醌含量（mg/g）的RSD=1.66%，符合测定要求。
2.3.5 回收率实验分别精确称取同一样品5份，定量精确加入大黄素对照品，按照上述制备游离蒽醌方法制备供试品溶液，并测定含量。经过氯仿提取的残渣，再定量精确加入大黄素对照品，按照上述方法制备结合型蒽醌供试液，并测定含量，结果显示：游离蒽醌回收率为101%～107%（n=5）；结合型蒽醌回收率为99%～104%（n=5）。
2.3.6 含量测定按照上述方法，制备样品的供试液，并测定其吸光度，依回归方程计算结合型蒽醌的含量。结果见表1～2。
2.4 泻下实验［3］将禁食24 h的小鼠150只，随机分为15组（每组雌雄各半），苦味酸标记。各组分别灌服提取物0.2 ml/10 g体重(25 g/kg体重),对照组灌服同体积的生理盐水。各鼠分别置于铺有滤纸、反罩的烧杯内进行观察，记录小鼠排稀粪时间及数目，连续观察6 h，6 h内未泻者，排稀粪时间按360 min记，排稀便次数按0次记。 表1 何首乌块不同蒸制时间饮片中结合型蒽醌含量表2 何首乌厚片不同蒸制时间饮片中结合型蒽醌含量
2.5 结果分析数据呈偏态分布，排稀粪时间和排稀便次数用参比差值法统计比较,致泻百分率用简化直接概率法统计比较。与生首乌比较，何首乌块蒸制4 h对排稀便次数有明显的抑制作用（P<0.01）,但对排稀便时间、致泻百分率则影响不明显（P>0.05），蒸制6 h则无致泻作用，结合型蒽醌含量低于2.09 mg/g，此时淀粉粒完全糊化，为了最大限度地保护有效成分二苯乙烯苷,何首乌块蒸制6 h最佳；何首乌厚片蒸制3 h对排稀便次数、致泻百分率有明显的抑制作用（P<0.01）,但对排稀便时间则影响不明显（P>0.05），蒸制4 h无致泻作用，结合型蒽醌含量低于2.0 mg/g，此时淀粉粒完全糊化，为了最大限度地保护有效成分二苯乙烯苷,厚片蒸制4 h为最佳。结果见表3～4。 表3 何首乌块（0.8～1 cm）不同炮制时间 炮制品对小鼠排便时间和次数的影响表4 何首乌厚片（2～4 mm）不同炮制时间
3 讨论
何首乌生熟有别，炮制可使其结合型蒽醌含量降低，消除泻下的副作用，结合型蒽醌含量降低。但在《中国药典》2005年版中，制何首乌实行单列，增加HPLC测定制何首乌的二苯乙苷的含量，对影响制何首乌质量的结合型蒽醌没有限定,造成何首乌炮制不当，产生泻下作用,建议下一版《中国药典》中增加结合型蒽醌的含量测定。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部 ［S］.北京：化学工业出版社，2005：129.
［2］ 冯立彬，杨婷婷，赵丽芬，等. 何首乌最佳炮制工艺的研究［J］.中医药信息，1998，15(1)：11.
［3］ 冯 奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社,1993：334.