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作者：艾尼娃尔?艾克木，美丽万?阿不都热依木，王岩，张?@
【摘要】 目的采用比色法测定维吾尔药黑种草子中总黄酮的含量。方法以芦丁作对照品，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠体系为显色剂,检测波长为500 nm。结果线性范围为0.008～0.040 mg?ml-1，平均回收率为98.2%，相对标准偏差(RSD)为0.55%。结论该法为控制维吾尔药黑种草子的内在质量提供了依据。
【关键词】 维吾尔药黑种草子； 总黄酮； 比色法
Abstract：ObjectiveTo analyze the total content of flavonoids in Nigella glandulifera Preyn et Sint by colorimetric method.MethodsRutin was used as reference substance and the detection wavelength was 500 nm. ResultsThe linearity of flavonoids was fine in the range of 0.008～0.040 mg/ml,the average recovery rate was 98.2%,and RSD was 0.55%(n=5).ConclusionThe method has laid the foundation for the control of the inherent quality in Nigella glandulifera Preyn et Sint.
Key words：Nigella glandulifera Preyn et Sint； Total flavonoids； Colorimetric method
黑种草为毛茛科(Raunnculaceae) 黑种草属(Nigella)植物，一般药用部位为种子。论文学术科研网目前作为药用的3个种分别为瘤果黑种草（又名腺毛黑种草）、果黑种草（又名家黑种草Nigella sativa L.）以及黑种草。瘤黑种草Nigella glandulifera Preyn et Sint为新疆维吾尔族和西双版纳傣族习用药材，维吾尔族名为斯亚旦，秋季采收成熟果实，除泥沙及果皮，晒干，得干燥种子入药。其性味甘，辛，温。功效为利尿，补脑肾，活血，解毒，下乳，通经，止咳，乌发，抗衰老，常用于治疗胸闷气促、乳肿、耳呜、乳汁减少、热淋、石淋、闭经等症［1］，瘤黑种草在新疆大部分地区都有种植，如吐鲁番、善鄯等地。为了进一步开发和利用其药用价值，本实验对维吾尔药黑种草子的总黄酮含量进行了测定。
1 仪器与材料
TU－1800型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；电热恒温水浴锅（型号：HH-S4）；电子天平（型号：AB104-N）； 芦丁对照品由中国药品生物制品检定所提供，亚硝酸钠，硝酸铝， 氢氧化钠，甲醇试剂均为分析纯；实验用水为蒸馏水。
维吾尔药黑种草子购于新疆维吾尔民族医院，经新疆医科大学生药学教研室邢文兵鉴定。
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2 方法与结果
2.1 维吾尔药黑种草子黄酮类化合物的提取取维吾尔药黑种草子25 g精密称定，置100 ml圆底烧瓶中，加入甲醇50 ml，回流3 h，滤过，提取液置100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，待用。
2.2 标准曲线的绘制精密称取芦丁对照品100 mg,置50 ml容量瓶中，加入甲醇70 ml，置水浴中微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，得浓度为2.0 mg?ml-1的标准溶液。精密量取对照品溶液0.0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 ml，置10 ml量瓶中，分别加水至2.4 ml，再分别加5%NaNO2溶液0.4 ml，摇匀，放置6 min；再加10%Al（NO3）3溶液0.4 ml，摇匀，放置6 min；再加10%NaOH溶液4.0ml，摇匀，室温放置15 min。在500 nm波长处测定吸光度，同时以试剂空白作参比。以吸光度为纵坐标，溶液质量浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2.3 测定波长的选择精密吸取3.0 ml芦丁,余下部分按“2.3”方法操作，在紫外-可见分光光度计上，波长400～800 nm扫描，确定最大吸收波长为500 nm。
2.4 标准曲线与回归方程结果表明，芦丁标准溶液浓度线性关系良好。得到回归方程：A = 0.010 9C - 0.000 3，r=0.999 8。
2.5 5 维吾尔药黑种草子总黄酮含量的测定精密量取样品溶液0.5 ml，置10ml量瓶中，余下部分按“2.3”项方法操作，在500 nm波长处平行测定5次，同以样品空白做参比。根据回归方程，计算总黄酮浓度。根据公式：总黄酮含量（%）=（黄酮化合物质量/样品质量）×100%，得维吾尔药黑种草子总黄酮含量。结果见表1。表1 维吾尔药黑种草子总黄酮含量测定结果（略）
2.6 精密度实验取一定质量浓度的供试品溶液，按“2.3”项显色，连续测定5次, 结果见表2。采用本法测定维吾尔药黑种草子总黄酮含量，精密度良好，其相对标准偏差（RSD）为 0.59%。表2 精密度实验结果（略）
2.7 稳定性实验取对照品溶液及供试品溶液，按“2.3”项显色，于室温分别放置0，15，30，45，60 min，测定对照品及供试品溶液吸光度，其RSD分别1.68%，2.92%。表明对照品及供试品溶液在1 h内稳定。结果见表3。表3 稳定性实验结果（略）
2.8 回收率实验精密称取已知量的维吾尔药黑种草子5份，分别精密加芦丁对照品适量，按“2.3”项下方法测定，平均回收率为98.2%，RSD为0.55%。结果见表4。表4 回收率实验结果（略）
3 讨论
有关维吾尔药黑种子草中总黄酮的含量测定，目前尚未见相关报道。本方法采用甲醇回流提取维吾尔药黑种草子中总黄酮，以NaNO2-Al(NO3)3-NaOH体系为显色剂，利用分光光度法测定总黄酮，操作简便，重复性好，结果准确可靠，为维吾尔药黑种草子的质量控制提供了可行的方法。