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【关键词】 念珠菌；微生物敏感性试验；耐药性
［摘要］ 目的：研究KONT真菌显色MIC药敏与丹麦ROSCO药敏纸片扩散法检测酵母菌对抗菌药物敏感性结果的差异，方法：同时应用两种方法检测79株临床分离酵母对抗真菌药物的敏感性，并进行分析结果。结果：两种方法所策酵母菌对抗真菌药物的总符合率为98.2％，经配对χ2检测，差异无显著性（P>0.05）。结论：KONT真菌显色MIC药敏试剂盒与丹麦ROSCO药敏纸片扩散法具有较好的重复性，而KONT真菌显色药敏具有操作简便，结果易判断，快速提供准确结果，具有在临床上应用盒进一步推广的前景。
［关键词］ 念珠菌；微生物敏感性试验；耐药性
随着高效广谱抗生素的滥用，以及使用免疫拟制剂。肾上腺皮质激素。抗肿瘤药物、器官移植、导管插入或获得性免疫缺陷综合症等因素，真菌感染日益严重，抗真菌药物的广泛应用导致出现真菌的耐药现象［1］。因此，开展真菌的体外药敏试验，指导临床合理用药已受到越来越多的关注［2］，为了寻求一种既准确可靠、方便易行，又与临床疗效相符合的检测方法，我们应用KONT真菌显色药敏试剂盒与丹麦ROSCO药敏纸片扩散法，分别对临床分离的79株酵母菌做药敏测试，探讨其结果的准确和一致性。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 试验菌 我院2005年1月至2005年6月确诊为酵母菌感染病例的标本共79份，其中呼吸道标本中分离率最高，与相关报道相似［3］，用法国生物梅里埃ATB细菌鉴定系统ID32C板条和BIOKONT16C酵母菌鉴定板条（温州康泰生物科技有限公司提供）鉴定。经2次以上培养为同一种酵母菌后确定为病原菌，其中包括白色念珠菌57株、热带念珠菌13株、光滑念珠菌3株、季也蒙念珠菌3株、克柔念珠菌2株、近平滑念珠菌1株。
1.1.2 标准质控菌 为了保证测定的标准化和可信度，采用参考菌株白色念珠菌（ATCC 64548）作对照。由温州康泰生物科技有限公司提供。
1.1.3 KONT真菌显色MIC药敏试剂盒 由温州康泰生物科技有限公司提供的FUNGUS7试剂盒。
1.1.4 ROSCO药敏片和培养基 购于广州乐通泰生物科技有限公司。
1.2 方法
1.2.1 FUNGUS7真菌显色MIC药敏试剂盒药敏测定 用无菌水制备酵母菌悬液并调成2 Mcfarland浊度，取100 μl加入培养液中混匀，取药敏板一块，每孔加100 μl，30 ℃～35 ℃孵育20 h～24 h，每孔加显色液1滴，5 min后根据显色判断结果（红色为耐药；淡绿色为敏感）。
1.2.2 ROSCO药敏纸片药敏测试 用无菌盐水制备酵母悬液并调成0.5 McFarland浊度，再用生理盐水1∶1稀释（克柔念珠菌1∶10稀释）。用棉签将所制菌液挤干后均匀涂步至RPMI1640平板上，待表面干后分别贴上药敏纸片。并用标准菌株做质控。30 ℃～35 ℃孵育20 h～24 h后读取结果，如果生长不足再延长至48 h。
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1.3 统计学方法 采用配对χ2检验进行数据处理。
2 结果
2.1 各质控菌株测定均在质控范围内，2种酵母菌药敏试验结果 见表1～表7。
表1 5氟胞嘧啶（5FC）对照结果（略）
注：结果符合率=（78/79）×100％=98.7%χ2检验：P>0.05对照无差异。
表2 两性霉素B(AMB)对照结果（略）
注：结果符合率=（79/79）×100％=100%χ2检验：P>0.05对照无差异检验
表3 制霉菌素（NYS）对照结果（略）
注：结果符合率=（78/79）×100％=98.7%χ2检验：P>0.05对照无差异
表4 咪康唑（MIC）对照结果（略）
注：结果符合率=（75/79）×100％=94.9%χ2检验：P>0.05对照无差异
表5 益康唑（ECO）对照结果（略）
注：结果符合率=（77/79）×100％=97.5%χ2检验：P>0.05对照无差异
表6 伊曲康唑（ITC）对照结果（略）
注：结果符合率=（76/79）×100％=96.2%χ2检验：P>0.05对照无差异
表7 氟康唑（FLU）对照结果（略）
注：结果符合率=（77/79）×100％=97.5%χ2检验：P>0.05
比较结果见表8。 。
表8 不同菌种对2种方法检测的耐药率比较（略）
实验结果提示，KONT真菌显色MIC药敏试剂盒与丹麦ROSCO药敏纸片扩散法结果符合率基本一致。两种方法的总符合率为：（540/553）×100％=98.2％，经配对χ2检验，差异无显著性（P＞0.05）。丹麦ROSCO药敏纸片扩散法接种液浓度的控制尤为重要，过浓会导致唑类药物拟菌圈判断困难，过浓或过淡都会导致拟菌圈大小的改变而影响结果。对于大多数的菌株，接种液浓度为5×105 cfu/ml，对于克柔念珠菌，先配0.5麦氏比浊度再用生理盐水1∶10稀释，这与其他药敏方法不同的。多数菌在培养20 h～24 h后测量拟菌圈，个别菌如：新型隐球菌、光滑念珠菌等需40 h后才能准确测量。KONT真菌显色MIC药敏板氏由7种抗菌药组成，每种抗菌药由二个稀释度，可报告最低拟菌浓度（MIC），赠送药敏专家报告软件，在指导临床用药方面更有指导意义。临床所有酵母菌标本均在24 h内报告。显色结果更容易判断。操作简单，只需经过调菌液和加入菌液二步就可完成，而药敏纸片扩散法需经过调菌液、3次涂步菌液、晾干、接种药敏纸片等步骤。从表8不同菌种两种方法测定的耐药率比较来看，也是较一致的，唑类药物对克柔念珠菌和光滑念珠菌都耐药，可能与此类抗真菌药的广泛应用或天然耐药有关［4］。唑类药物之间是否存在交叉耐药问题，有待进一步研究。综上所述，KONT真菌显色MIC药敏试剂盒与丹麦ROSCO药敏纸片扩散法具有较好的重复性，而KONT真菌显色药敏具有操作简单。结果易判读。快速提供准确结果，具有在临床上应用和进一步推广的前景。
参考文献：
［1］ Ghannum MA,Rex JH, GalgianiJN.Susceptibility testing of fungi:current status of correlation of in vitro data with clinical ［J］.Clin Microbiol,1996,34:489495.
［2］ 沈定霞，谢灵，刘梅，等.酵母菌对氟康唑的敏感性及三种药物试验方法的比较［J］.中华医学检验杂志，1998，21：199201.
［3］ 陈东刚，陈冬梅，建美，等.727株真菌的分布与药敏分析［J］.中国微生物杂志，2001，13：99100.
［4］ Dupont B,Graybill JR Amstrong D, et al.Fungal infections in AIDS patients(J).J Med Vet Mycol,1992,30:1928.