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作者：陈震，王鹏，黄雯霞，刘鲁明
【关键词】 生脉注射液
［摘要］ 目的：观察生脉注射液对5氟尿嘧啶(5fluorouracil, 5FU)抗肿瘤的增效减毒作用。方法：建立H22肝癌荷瘤鼠模型后，将50只小鼠随机分为5组：对照组、5FU组和生脉注射液（大、中、小剂量）联合 5FU组，每组10只。造模次日开始进行干预处理：对照组、5FU组和生脉注射液（大、中、小剂量）联合 5FU组分别腹腔注射等容量生理盐水、5FU、生脉注射液（大、中、小剂量）联合5FU，共14 d。停药次日处死小鼠，观察瘤重抑制率、免疫功能、肝肾功能及外周血细胞变化。结果：生脉注射液联合5FU各组小鼠的肿瘤生长抑制率明显高于5FU组和对照组（P＜0.05)；与对照组相比，5FU组CD3、CD4、CD4/CD8、IgG、IgM值明显降低（P＜0.05)，而各生脉注射液联合5FU组CD3、CD4、CD4/CD8、IgG、IgM值升高（P＜0.05)；与对照组相比，5FU组的血丙氨酸氨基转移酶升高、白细胞和血小板数量降低（P＜0.05)；而各生脉注射液联合5FU组血丙氨酸氨基转移酶与对照组比较无明显变化，白细胞数下降程度较轻。结论：生脉注射液可增加5FU的抑瘤效果，提高机体免疫功能，减轻化疗毒副反应。
［关键词］ 抑瘤率; 免疫力; 副反应; 5氟尿嘧啶; 生脉注射液
Experimental study on effects of Shengmai Injection: enhancing 5FU antitumor efficacy and reducing its toxicity
ABSTRACT Objevtive: To observe the effects of Shengmai Injection on enhancing efficacy and reducing toxicity of 5fluorouracil (5FU). Methods: Fifty hepatoma 22 bearing mice were randomly divided into five groups: control group, 5Fu group, Shengmai Injection (low, medium and high dose) combined with 5FU groups. There were 10 mice in each group. Mice in the five groups were injected introperitoneally the same amount of normal saline, 5FU (20 mg・kg－1・d－1) and Shengmai Injection (3.5 ml・kg－1・d－1, 7 ml・kg－1・d－1 and 14 ml・kg－1・d－1) combined with 5FU respectively, once a day for 14 days. After that, all mice were killed and the tumor inhibiting rates, index of immunological function, liver and kidney function and the blood cells in the peripheral blood were observed. Results: The tumor inhibiting rates were higher in each Shengmai Injection combined with 5FU group than that in the 5FU group (P＜0.05). The levels of CD3、CD4、CD4/CD8、IgG、IgM in 5FU group were lower (P＜0.05), while those in the three Shengmai Injection combined with 5FU groups were higher than those in the control group (P＜0.05). The level of serum alanine aminotransferase (ALT) was higher and the WBC and PLT counts in the peripheral blood wer re lower in 5FU group than those in the control group (P＜0.05). But the levels of serum ALT in the three Shengmai Injection combined with 5FU groups were consistent with that in the control group and the amounts of WBC decreased slightly. Conclusion: Shengmai Injection can enhance the antitumor effect of 5FU. It can also improve the immunological function and reduce the adverse reactions of chemotherapy.
KEY WORDS tumor inhibiting rates; immunity; adverse reaction; 5fluorouracil; Shengmai Injection
生脉注射液处方源于古方“生脉散”，此方收录于《内外伤辨感论》，由红参、麦冬、五味子三味药组成，具有益气养阴、复脉固脱的作用。目前，中医药在肿瘤放、化疗中的减毒增效作用已被确认［1］。本研究通过建立H22肝癌荷瘤小鼠模型，探讨生脉注射液联合化疗药物5氟尿嘧啶(5fluorouracil, 5FU)治疗肿瘤是否具有减毒增效的作用。
1 材料与方法
1.1 材料 雌性ICR小鼠50只，体质量（20±2）g，购于中国科学院上海实验动物中心，饲养于复旦大学上海医学院实验动物中心；H22肝癌细胞，购于上海医药工业研究院；BectonDickinson FACSCaliburxi流式细胞仪，购于美国BectonDickinson公司；日本7600010全自动生化分析仪、K21血球计数仪；3321小鼠CD4FITC单抗、2769小鼠CD3PE单抗、2778小鼠CD8FITC单抗，购于法国曼特生物基因技术有限公司；5FU注射液，规格0.25 g/支，上海旭东海普药业有限公司生产，批号040302；生脉注射液，规格10 ml/支，上海和黄药业公司生产，批号040615。
1.2 模型建立 瘤细胞复苏后接种于小鼠腹腔内，取瘤细胞处于快速增殖期的腹水，用生理盐水稀释，调整细胞浓度至2×107个细胞/ml。动物常规消毒，沿腋下皮下注射瘤细胞悬液0.2 ml。
1.3 分组处理 造模后当日50只小鼠随机分为5组：对照组、5FU组、生脉注射液（大、中、小剂量）联合5FU组，每组10只。5FU按小鼠体质量20 mg/kg给药，生脉注射液大、中、小剂量分别按小鼠体质量3.5、7、14 ml/kg给药，并用生理盐水调节容量，配制成每只小鼠0.4 ml进行腹腔注射，对照组仅予等量生理盐水腹腔注射。于复制模型次日起给药，连续给药14 d。
1.4 标本处理 停药次日脱颈椎处死动物，眼眶取血，送复旦大学肿瘤医院中心实验室及检验科检测血常规、肝肾功能、免疫功能；分离瘤块，称重，计算瘤重抑制率。瘤重抑制率（％）=（对照组平均瘤重－治疗组平均瘤重）/对照组平均瘤重×100%。
1.5 统计学方法 实验数据采用SPSS 10.0软件进行统计学处理，计量资料以x±s表示，采用方差分析的两两比较法。
2 结果
2.1 瘤重抑制率测定 5FU组瘤重抑制率为37.03%，生脉注射液（大、中、小剂量）组的瘤重抑制率分别为63.28%、66.46%和62.90%，均明显高于单纯5FU组（P＜0.05)，其中以生脉注射液中剂量组的抑制作用更显著，但差异无统计学意义。
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2.2 T细胞亚群检测 H22荷瘤鼠在单独注射5FU后出现外周血CD3、CD4及CD4/CD8比值降低，与对照组比较有统计学意义（P＜0.05)；而生脉注射液联合5FU各组外周血CD3、CD4及CD4/CD8比值均有所提高，与5FU组及对照组比较有统计学意义（P＜0.05)。但生脉注射液大、中、小各剂量组在提高CD3、CD4以及CD4/CD8比值方面没有表现出剂量依赖效应。见表1。
2.3 免疫球蛋白检测 H22荷瘤鼠在注射5FU后，IgG、IgM的产生明显低于对照组（P＜0.05），而在联合生脉注射液治疗后可使IgG、IgM的产生水平增高，与对照组和5FU组比较，差异有统计学意义（P＜0.
05）。各组之间IgA水平比较无明显差异。见表2。
2.4 肝肾功能检测 H22荷瘤鼠在应用5FU后血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase, ALT）升高，而生脉注射液联合5FU应用时可使ALT保持正常水平，大、中、小剂量组分别与5FU组比较有显著性差异（P＜0.05）。各组之间血清白蛋白（albumin, Alb）、尿素氮（blood urea nitrogen, BUN）的比较则无明显差异。见表3。
2.5 血常规检测 荷瘤鼠在应用5FU后出现白细胞、血小板数量的明显降低，而对血红蛋白的影响较小。联合生脉注射液各组的白细胞、血小板数量的下降程度较单纯5FU组小（P＜0.05）。但未发现存在剂量依赖效应。见表4。
表1 生脉注射液对T细胞亚群的影响（略）
Tab 1 Effect of Shengmai Injection on Tlymphocyte subgroups
*P<0.05, vs control group
表2 生脉注射液对体液免疫的影响（略）
Tab 2 Effect of Shengmai Injection on humoral immune function
*P<0.05, vs control group
表3 生脉注射液对肝肾功能的保护作用（略）
Tab 3 Protective effect of Shengmai Injection on liver and renal function
*P<0.05, vs control group; △P<0.05, vs 5FU group
表4 生脉注射液对外周血细胞计数的影响（略）
Tab 4 Effect of Shengmai Injection on peripheral blood cell count
*P<0.05, vs control group; △P<0.05, vs 5FU group
3 讨论
当前恶性肿瘤的治疗是多种治疗手段联合应用的综合治疗模式，化疗作为一种治疗手段，坚持按时、足量是治疗的一个重要因素，而由化疗引起的副反应如白细胞下降、免疫功能降低、胃肠道反应等，有可能限制全程剂量而影响疗效。
中药对机体的免疫调节和扶正抗癌作用已越来越受到人们的重视［2,3］。生脉注射液作为中医扶正的经典方剂，现代研究证实其具有强壮、抗疲劳、抗辐射、促进造血功能、保护心肌细胞、抗休克、增加机体免疫功能和抗肿瘤等多种作用［4,5］。肿瘤患者，尤其是处于放、化疗中的患者，多属气阴两虚、正气亏损之证，因此应用益气养阴之剂可能达到扶正祛邪的目的。
本研究通过观察益气养阴中药制剂生脉注射液联合5FU抗H22肝癌荷瘤鼠的效果，发现生脉注射液联合5FU组其肿瘤抑制率明显高于5FU组，提示生脉注射液对5FU的抗种植瘤生长具有一定的增效作用。
肿瘤患者的免疫功能不仅与肿瘤的发生和发展密切相关，而且对判断肿瘤患者的治疗效果和评估疾病的预后都有重要的参考价值［6,7］。肿瘤的存在不仅抑制机体的细胞免疫功能，同时也抑制体液免疫功能［8］，而化疗药物的应用可以加重机体的免疫抑制［9］。因此提高肿瘤患者的免疫功能，尤其是防治化疗后出现的免疫机能的严重抑制，成为抗肿瘤治疗的一个主要方面。淋巴细胞CD4/CD8比值是反映机体免疫紊乱的敏感指标，当免疫功能受抑制时，CD4下降，CD8上升，CD4/CD8比值减少［10］。IgG、IgM水平则反映了体液免疫能力。本实验研究发现：荷瘤鼠在单纯应用5FU后其外周血CD3、CD4、CD4/CD8比值降低，CD8升高；在体液免疫方面主要表现为IgG、IgM水平降低。通过联合生脉注射液，可使CD3、CD4、CD4/CD8比值升高，CD8降低，促进了机体细胞免疫功能的增强，同时对体液免疫也有促进作用，促使其抗体如IgG、IgM分泌增加，从而提高机体对肿瘤细胞的免疫应答，提高机体的抗肿瘤效应。
化疗药物的应用所导致的骨髓抑制、肝肾功能损害，往往引起化疗中断，直接影响了患者的疗效及生存期。部分临床研究发现：生脉饮煎剂具有保肝和保护骨髓的作用［11］。本实验中，荷瘤鼠在单独应用5FU后出现ALT升高及白细胞数量明显降低，通过联合生脉注射液后，荷瘤鼠ALT的水平基本保持稳定，外周血白细胞数量的降低程度较轻，说明化疗所引起的肝功能损害与骨髓抑制状态得到了改善。这 一结果支持了生脉注射液在肿瘤治疗中具有减毒增效的作用。
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