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作者：张有成 韩瑞，侯亚利，李宝亮，牛发良，赵自刚 牛春雨
【摘要】 目的观察夏至草醇提物对失血性休克大鼠多器官自由基损伤的影响。方法Wistar雄性大鼠18只，随机分为夏至草组、模型组和对照组（均n=6）。夏至草组和模型组复制失血性休克模型，维持90 min，对照组仅手术。夏至草组自颈静脉缓慢推注夏至草醇提物（5 g/ml，6 g/kg?bw），其它两组以等量生理盐水代替。40 min后，制备肝、肾、心肌、肺组织匀浆，观察组织匀浆自由基指标的变化。论文学术科研网结果与对照组相比，模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆MDA含量显著升高，SOD活性降低；夏至草组各器官组织匀浆MDA含量显著低于模型组，SOD活性升高，除心肌组织匀浆SOD活性低于对照组外，其它各指标与对照组均无统计学意义。结论夏至草醇提物能明显减轻大鼠重症失血性休克后各器官的自由基损伤。
【关键词】 夏至草 失血性休克 器官 自由基
Abstract:ObjectiveTo observe the effects of ethanol extract from Mrrubium incisum on free radical injury of organs in hemorrhagic shock rats. Methods18 male wistar rats were randomly divided into three groups: Mrrubium incisum group (n=6), model group (n=6) and control group (n=6). The hemorrhagic shock was established in Mrrubium incisum group and model group for 90 min. Ethanol extract from Mrrubium incisum was venous injected in Mrrubium incisum group (5g/ml, 6g/kg?bw); in other groups ethanol extract from Mrrubium incisum was replaced by normal saline. After 40 min, the liver, kidney, cardiac muscle and lung were taken out for making 10% homogenate, and the free radical indexes were determined in homogenate.ResultsThe MDA content of liver, kidney, cardiac muscle and lung homogenate in model group significantly increased, and SOD activity was significantly lowered as compared with control group. The MDA contents of liver, kidney, cardiac muscle and lung homogenate in Mrrubium incisum group were significantly decreased, and SOD activities were significantly increased as compared with model group,and the indexes of Mrrubium incisum group were not statistical different as compared with control group, except the SOD activity of cardiac muscle homogenate.ConclusionEthanol extract from Mrrubium incisum could markedly alleviate the free radical injury of organs in hemorrhagic shock rats.
Key words:Mnubium incisum; Hemorrhagic shock; Organ; Free radicals
淋巴循环是循环系统的重要组成部分，近年来，淋巴循环维持机体稳态和疾病中的作用逐渐受到重视［1］。失血性休克（hemorrhagic shock）致组织微循环低灌注是 是引起肺、心、肾、肝等多个器官的功能障碍、诱发多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome, MODS）的主要因素之一。我室研究表明，淋巴微循环与休克的发生、发展及转归关系密切［2］，良好的淋巴微循环有利于休克的代偿，淋巴微循环障碍可促进休克的恶化［3］。夏至草具有利水消肿、活血化淤作用［4］，夏至草醇提物可明显改善大鼠的淋巴微循环障碍［5］。本研究观察了夏至草醇提物对失血性休克大鼠多器官自由基损伤的影响，旨在阐明夏至草对失血性休克以及淋巴微循环的药理学作用。
1 材料与仪器
1.1 动物与分组
18只健康清洁级Wistar雄性大鼠（中国医科院实验动物繁育中心提供），体质量220～300 g。随机均分为3组（均n=6）：对照组（仅行手术）、模型组（复制失血性休克模型，输血加生理盐水进行治疗）、夏至草组（复制失血性休克模型，输血加夏至草醇提物进行治疗，MI）。实验前大鼠禁食12 h，自由饮水。
1.2 药品与仪器
唇形科夏至草属植物夏至草 Mrrubium incisum Benth 的全草（内蒙古驻张家口医药站提供，经河北北方学院中医系姜希强教授鉴定），按文献［6］报道方法，制备夏至草醇提物，经水煎醇沉，再经活性炭脱色、灭菌制成原生药含量为5 g?ml-1的注射液（pH、澄清度、溶血实验检测均为合格）；戊巴比妥钠（北京化学试剂厂生产，批号20000919）；肝素钠（北京奥博星生物技术责任有限公司生产，批号001218），FJ-200型高速分散均质机（上海标本模具厂），自动抽注机（浙江大学医学仪器厂）。
2 方法
2.1 失血性休克模型的复制及液体复苏所有大鼠肌注质量分数2％的戊巴比妥钠（50 mg/kg）全身麻醉，无菌手术，行右侧颈总动脉和左侧颈静脉插管，备放血及输液用。舌静脉注射质量分数0.5%肝素（1 ml/kg，700 U/ml），全身抗凝。稳定10 min后，经自动抽注机自颈总动脉缓慢放血（失血量以全血量的1/5计，全血量以体重1/13计），3 min完?，保留备回输用。以无菌林格式液瓶作为Lamson瓶，连接无菌输液器，将液面调整至固定高度，维持低血压（40 mmHg）90 min，复制大鼠重症失血性休克模型［7］。然后，模型组、夏至草组以自动推注机自左侧颈静脉缓慢回输放出之血液；输血完毕后，夏至草组输入6 g?kg-1剂量（生药）的夏至草醇提物（输前用生理盐水等倍稀释），模型组输入等量的生理盐水。对照组仅麻醉及颈部手术，不放血及输液复苏。
2.2 组织匀浆标本的制备行液体复苏后（或相当）3 h，分别处死动物。选择固定的肝、肾、心、肺组织各0.8～1.0 g，加9倍的4℃无菌生理盐水，应用FJ-200型高速分散均质机低温制备10%组织匀浆，应用高速低温离心机以2 500 r/min离心10 min（离心半径8 cm），取上清液置于-26℃冰箱内。
2.3 组织匀浆MDA,SOD测定应用改良硫代巴比妥酸（TBA）微量法测定各脏器组织匀浆MDA含量、黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性（试剂盒购自南京建成生物工程研究所），严格按照试剂盒说明书要求进行操作。组织匀浆蛋白以考马斯亮蓝法进行定量。
2.4 统计学处理所有数据以±s表示，经SPSS 11.0统计软件包进行单因素方差分析，两组间比较用两样本均数t检验，P<0.05为具有显著性差异。
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3 结果
3.1 夏至草醇提物对失血性休克大鼠各器官组织匀浆MDA含量的影响模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆MDA含量均显著高于夏至草组和对照组（P<0.01），而夏至草组肝、肺组织匀浆MDA含量与对照组比较无统计学意义（P>0.05）。见表1。
3.2 夏至草醇提物对失血性休克大鼠各器官组织匀浆SOD活性的影响模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆SOD活性均显著低于对照组（P<0.01）；夏至草组除肾匀浆SOD活性低于对照组外（P<0.05），肝、心肌、肺组织匀浆SOD活性与对照组均无统计学差异（P>0.05），且各器官组织匀浆SOD活性高于模型组（P<0.01）。见表2。表1 夏至草醇提物对休克大鼠各器官组织匀浆MDA含量的影响（略）表2 夏至草醇提物对休克大鼠各器官组织匀浆SOD活性的影响（略）
4 讨论
失血性休克是临床急症，微循环障碍以及凝血功能紊乱是引起大鼠肺、肾、肝等多个器官的功能障碍、诱发多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfuncti on syndrome, MODS）的主要因素之一［1］。因此，从改善微循环障碍以及血液流变性异常来寻找药物和其他有效措施正成为医学研究的重要课题之一。夏至草具有利水消肿、活血化淤作用［6］，前期工作研究表明［5］，静脉推注不同剂量的夏至草醇提物可改善大鼠的淋巴微循环障碍，增强肠系膜淋巴管收缩频率及幅度，肠淋巴流量、蛋白输出量明显升高，该作用在6 g/kg剂量时最显著，1 g/kg剂量则对淋巴循环未发生影响，在一定范围内呈剂量效应关系。为此，本研究选择了应用6 g/kg的剂量，从自由基损伤角度观察夏至草醇提物对急性微循环障碍大鼠器官损伤的影响，阐明夏至草的药理学作用，并为器官损伤的药物治疗提供实验依据。
自由基损伤在细胞损伤乃至器官功能障碍的发病学中具有重要作用［8］。研究结果表明，大鼠重症失血性休克后，模型组肝、肾、心肌、肺组织匀浆自由基的代谢产物MDA含量均显著升高，具有清除自由基功能的SOD活性降低，结果提示失血性休克在引起大鼠急性微循环障碍的同时，加重了组织细胞的缺氧以及酸性产物潴留，加速了自由基的生成，这是引起自由基产生和释放的重要原因［9］，表现在各脏器组织匀浆的自由基产物MDA含量增多，也加速了SOD的消耗；而过多的氧自由基进一步激活补体，补体系统被激活，补体活化产物（C3a，C3b，C5a等）可以刺激巨噬细胞和中性粒细胞释放细胞因子和氧自由基，后者进一步通过膜脂质过氧化作用攻击内皮细胞而加重损伤，形成细胞损伤的恶性循环。输入夏至草醇提物后，各脏器组织匀浆MDA的含量均显著低于模型组，SOD活性升高，结果提示输入夏至草醇提物有效地减轻了失血性休克大鼠各重要器官的自由基损伤，这主要是由于夏至草醇提物具有良好的改善微循环作用，减轻了休克时大鼠的急性微循环障碍，从而缓解了细胞的缺氧状态，抑制了自由基释放，使机体自由基的产生与清除趋于平衡，减轻自由基对组织细胞的损伤作用，最终达到了保护器官功能的作用。
综上所述，夏至草醇提物对失血性休克障碍大鼠具有较好的保护作用，其机制与夏至草醇提物有效改善微循环流态［10，11］、改善细胞缺氧状态，从而减轻组织细胞的自由基损伤有关，这为深入研究夏至草醇提物的药理学作用提供了实验依据。以活血化淤类中药为靶标，可为微循环障碍类疾病的治疗开辟新途径。
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