【www.tuzhexing.com--医学类】
【摘要】 介绍了近十年来，卷丹和百合化学成分和提取方法方面的研究进展，主要集中在甾体皂苷、多糖和秋水仙碱；甾体皂苷的提取方法有醇提—大孔树脂吸附法、醇提—正丁醇萃取法；多糖的提取方法有水提醇沉法和复合酶法；秋水仙碱的提取方法有有机溶剂提取法和超临界二氧化碳流体萃取法。
【关键词】 卷丹 百合 成分 提取
Abstract：This article introduced the research advancement of Lilium lancifolium Thunb. and L.brownii F.E.Brown Var.viridulum Baker chemical compositions and the extraction method in recent ten years, mainly concentrated in the steroid saponin, the polysaccharide and the colchicine, the steroid saponin extraction has ethanol extract- the pocket resin absorption law and ethanol extraction -the normal butyl alcohol extraction method; the polysaccharide extraction has water extract and ethanol to sink, the compound enzyme law; the colchicine extraction has the organic solvent extraction process and the supercritical carbon dioxide fluid extraction method.
Key words：Lilium lancifolium Thunb.; L.brownii F.E.Brown Var.viridulum Baker; Ingredient ; Extraction
中药百合来源于植物卷丹Lilium lancifolium Thunb.百合L.brownii F.E.Brown Var.viridulum Baker 和细叶百合L.pumilum DC. 的干燥肉质鳞叶，最早记载于《神农本草经》，细叶百合主要分布于东北，野生为主，市场少见。卷丹和百合在全国分布较广，在长江流域广为栽培，为百合药材的主要来源。其主要成分有皂苷类、多糖、生物碱、微量元素及蛋白质、磷脂、无机元素等。研究表明，百合在止咳化痰、抗疲劳与耐缺氧、升高外周白细胞、降血糖及抑制迟发过敏性反应、催眠安神等方面均具有显著效果。论文学术科研网
1 化学成分
1.1 皂苷类
近几年来百合皂苷的研究主要集中于甾体皂苷，侯秀云等［1］从百合中分离得到β-谷甾醇(Ⅰ)、胡萝卜苷(Ⅱ)、正丁基-β-D-吡喃果苷(Ⅲ)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖3β，26-二羟基-5-胆甾烯-l6，22-二氧3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅳ)、26-O-β-D-吡喃葡萄糖3β，26-二羟基胆甾烷-16，22-二氧-3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅴ)［2］。其中Ⅳ和Ⅴ为新化台物，初步药理实验证明，这两种皂苷对二氧化硫引起的小鼠咳嗽有镇咳作用［2］。Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ为首次从该植物中分得。吉宏武等［3,4］以卷丹鳞茎为原料，通过光谱与HPLC等手段鉴定百合皂苷有两种，一种为含有提果皂苷元与3个糖基的甾体皂苷，一种为含有薯蓣皂苷元与3个糖基的甾体皂苷。吴晓斌等［5］以龙山百合为原料，发现百合皂苷与薯蓣皂苷有相同的薯蓣皂苷元。百合总皂苷提取物对自由基的清除作用比人参皂苷强［6］。杨秀伟等［7］分离并鉴定卷丹中两种甾体皂苷，麦冬皂苷D(ophipogonin D)，其结构为薯蓣皂苷元-3-O-?xO-α-L-鼠李糖基-(1→2)-O-［β-D-木糖基(1→3)］-β-D-葡萄糖苷?y，另一化合物为薯蓣皂苷元-3-O-?xO-α-L-鼠李糖基-(1→2)-O-［α-L-阿拉伯糖基(1→3)］-β-D-葡萄糖苷?y，经鉴定是一种新的化合物，定名为卷丹皂苷A(1ililancifoloside A)。
1.2 多糖类姜茹等［8］
从百合鳞叶中首次分离出一种水溶性多糖BHP，酸水解，薄层展开进行多糖组分分析，呈现D-半乳糖、L-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、L-鼠李糖 糖等斑点。该多糖作用于机体免疫系统，对小鼠免疫功能有明显的调理作用。刘成梅等［9，10］从新鲜百合的鳞叶中，分离得到LP1，LP2两种多糖，在多糖的组分分析中LP1由葡萄糖、甘露糖组成，比例为1∶2.46， LP2由葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸组成，比例为1∶0.73：2.61∶1.8∶0.84。这两种多糖单体对四氧嘧啶引起的高血糖小鼠有明显的降血糖功能，并且与浓度呈正相关。百合多糖LP2降血糖作用强于百合多糖LP1。赵国华等［11］从百合块茎中分离得到LBPS-I多糖，是一种纯粹的非淀粉类葡聚糖，是由α-D-(1, 4)-Glcp和α-D-(1, 3)-Glcp以2∶1的比例交替形成主链，并有α-D-(1,6)-Glcp侧链的葡聚糖。该多糖单体对移植性黑色素B16和Lewis肺癌有较强的抑制作用。Manal M Shehata 等［12］从百合中分离得到百合水溶性非淀粉多糖(WSNSP)。体外实验结果表明，百合球茎中WSNSP组分B可以直接抑制肿瘤细胞的生长；体内实验结果表明，WSNSP组分B具有抗癌功效，可以抑制小鼠S180肉瘤增殖，抑瘤率在45.68%以上。
1.3 生物碱类百合中生物碱研究早在20 世纪60 年代就有报道，主要集中在秋水仙碱。贺世洪等［13］利用极谱法，采用二阶导数直接测定其中秋水仙碱的含量，达0.006 4%。何纯莲、李新社等［14，15］采用超临界萃取法和高效液相测得湖南龙山产卷丹鳞片中秋水仙碱含量。百合中秋水仙碱，能抑制癌细胞的增殖，尤其对乳癌的抑制效果比较好［16］。
2 提取
2.1 皂苷及其苷元类
2.1.1 皂苷类甾体皂苷的提取分离有3种方法：醇提—大孔树脂吸附法、醇提—正丁醇萃取法和色谱法。吴晓斌、任凤莲等［5，17］分别讨论了温度、乙醇用量、回流时间和提取次数对百合总皂苷提取率的影响。采用正交实验法得出了百合总皂苷的最佳提取条件为：用80%乙醇(其体积为百合质量的6 倍)，在70℃回流提取3次，3 h/次。吴晓斌等［5］考虑百合总皂苷的含量和工业中的实际生产情况，确定最佳提取条件为6 倍于药材量的乙醇（浓度为70%），在60℃提取3次，3 h/次。用AB-8大孔吸附树脂柱分离，无水乙醇、丙酮-乙醚混合液沉淀干燥得百合皂苷，得率为0.253%。吉宏武等［18］采用微波处理卷丹百合，烘至含水量6%左右粉成80 目。选用甲醇为提取剂，采用超声波提取和水饱和正丁醇萃取百合中总皂苷，所建立的方法具有干扰小、准确度高、分析速度快等优点，抽提皂苷完全、适合于大量试样的分析。
2.1.2 皂苷元甾体皂苷元的提取有醇提酸水解—有机溶剂提取法、酸或酶水解—有机溶剂提取法。百合中甾体皂苷元的提取采用的是前者，百合皂苷经酸水解，乙醚萃取，氮气吹干，即得甾体皂苷元［3，4，19］。
2.2 百合多糖
2.2.1 水提醇沉法刘成梅等［20］以浸提温度、固液比、浸提时间为考察对象，进行正交实验，发现对百合多糖提取率影响程度为：温度>时间>固液比，确定百合多糖浸提最佳工艺参数：浸提温度95℃，时间2 h，固液比1：5。去蛋白采用酶-Seveag联用法，沉淀多糖。滕利荣等［21］分别就提取时间、溶剂体积、浸提温度进行单因素实验，发现热水提取百合多糖的最佳条件为：加水比70：1，浸提时间6 h，浸提温度60℃，在此条件下提取率可达10.87%。Sevag试剂离心除蛋白质，测定多糖含量。杨林莎等［22，23］讨论提取时间、提取次数、溶剂体积、浸提温度等因素对多糖得率的影响，采用正交实验法进行优选。影响百合多糖提取的主次顺序为温度>溶剂体积>浸提次数>浸提时间，最佳工艺为温浸温度80℃，但考虑到多糖解聚及淀粉糊化、变性，浸提温度设为65℃，溶剂体积l5倍量，浸提3 次，浸提时间4 h。Sevag法除蛋白，以多糖得率为指标，采取正交实验法探讨Sevag法中的氯仿与正丁醇的配比及与样品体积的比例关系，最佳工艺为氯仿-正丁醇体积比为3：1，样品-氯仿正丁醇体积比为5：2，振摇时间10min。测定多糖得率为5.2%。杨华等［24］用三氯三氟乙烷与seveage法联用脱蛋白，得百合粗多糖水溶液。以乙醇沉淀，丙酮、乙醚洗涤，冷冻干燥后得粗多糖。孙丽华等［25］用Sevag法脱蛋白，分离纯化所得活性多糖的得率为4.5%，多糖含量为96.8%。
2.2.2 复合酶法百合块茎中除多糖物质外，还含一定量的蛋白质、胶质、粗纤维及脂肪。这些物质的分解有利于多糖的分离和纯化。复合酶法提取百合多糖具有条件温和、杂质易除、提取率高和生物活性高等特点。因此选用复合酶系，将复合酶［ω(纤维素酶)：ω(果胶酶) ：ω(胰酶)=2：2：1］加入百合块茎干品中，考察pH、酶促反应温度、酶促反应时间对提取率的影响，确定酶法提取多糖的最佳反应条件：pH值是影响百合多糖提取率的显著因素，浸提液pH 7.0，浸提温度50℃，酶促反应时间90 min。在上述最佳条件下，测定了加酶量对多糖提取率的影响，最佳加酶量为3%。在最适酶提条件下提取率达31.03%，是热水提取法的2.85 倍［21］。
学术科研网
2.3 秋水仙碱
2.3.1 有机溶剂提取法李新社等［15］考察了溶剂种类、提取时间及提取方式对提取效果的影响，确定提取剂为乙醇，提取时间为8h，碱化百合粉能显著改善提取效果，提取率从0.95%提高到1.77%。何纯莲等［26］研究了提取温度、提取时间、溶剂用量、粒度4个因素对秋水仙碱提取的影响，确定萃取温度??溶剂用量??提取时间??粒度。最佳工艺条件为原料过20目筛，提取溶剂选用乙醇。80℃，溶剂用量6∶1，提取10 h，即可达到在此实验条件范围内的最佳提取效果。采用高效液相色谱法测得秋水仙碱的含量为43.2mg，含量为0.36‰。李谷才等［27］筛选出乙醇提取百合中秋水仙碱的最佳工艺条件：75℃时，用乙醇将过50目筛的百合粉以5：1，提取5h，可得秋水仙碱45.78 mg。在此条件下，用HPLC法测得百合中的秋水仙碱含量为4.58%。
2.3.2 超临界二氧化碳流体萃取法何纯莲、李新社、任凤莲、李谷才等［14,15,26,27］选取萃取温度、萃取压力、提携剂(乙醇)用量、萃取时间4个因素为变量，发现各因素的影响秩序为：萃取温度??萃取时间??萃取压力??提携剂用量。最佳条件为：40℃，18Mpa下，以300 ml乙醇作提携剂萃取2h。 测得萃取物粗品中含秋水仙碱24.5 mg，含量为6.38%。经HPLC法测定，测得百合中秋水仙碱含量为0.0485%。
3 小结
目前，对百合化学成分的研究已经有了较丰富的文献积累，但缺乏百合构效关系的研究，药理作用机理研究也不够深入，从整体上看缺乏横向的联系，因此要对百合进行系统全面的研究，可谓任重而道远。
百合化学成分提取分离研究，文献报道较多的?合皂苷和多糖类，其良好前景使得对它的提取有待于进一步研究改进，主要集中在简化工艺流程和引入新的研究方法，提高产物富集率和纯度上。
在水提醇沉法除蛋白方法比较中，从脱蛋白后的水溶性百合多糖损失和蛋白质去除效果来看，酶法与Seveage联用法优于Seveage法和三氯三氟乙烷与Seveage联用法，是一种很有效的植物多糖中脱蛋白方法。无论采用哪种，所得的水溶性百合多糖中蛋白质含量均在10%以上，其原因可能是百合水溶性多糖中部分蛋白质与多糖结合成紧密的糖蛋白复合物［28］。
百合是中华人民共和国卫生部审批通过的首批药食两用的植物，不仅临床上有着广泛的应用，而且作为加工保健产品的原料也极具有开发前景。因此对百合的栽培技术、功能因子的结构、含量、作用及在食品中稳定性等方面进行深入研究，使其最大限度地保留活性，是百合研究开发的趋势。
【参考文献】
［1］侯秀云，陈发奎. 百合化学成分的分离和结构鉴定［J］. 药学学报，1998, 33(12): 923.
［2］侯秀云，陈发奎，吴立军. 百合中的甾体皂苷的结构鉴定［J］. 中国药物化学杂志，1998, 8(1): 49.
［3］吉宏武，丁霄霖. 百合皂苷的提取分离与结构初步鉴定［J］. 林产化学与工业，2001, 21(3): 48.
［4］吉宏武，丁霄霖，陶冠军. 液相色谱-电喷雾电离质谱与电子轰击质谱联用筛选百合中的甾体皂甙［J］. 色谱，2001, 19(5): 403.
［5］吴晓斌，任凤莲，邱昌桂，等. 百合皂苷的提取、纯化及其鉴定［J］. 广州化学，2005, 30(2): 36.
［6］吴晓斌，任凤莲，邱昌桂，等. 百合皂苷的提取、纯化及其对羟自由基的清除作用［J］. 天然产物研究与开发，2005, 17(6): 777.
［7］杨秀伟，吴云山，崔育新，等. 卷丹中新甾体皂苷的分离和鉴定［J］. 药学学报，2002, 7(11): 863.
［8］姜茹，匡永清，吴少华. 百合免疫活性多糖的分离及其组成［J］. 第四军医大学学报，1998, 19(2): 188.
［9］刘成梅，付桂明，游 海，等. 百合多糖的纯化与化学结构鉴定研究［J］. 食品科学，2002, 23(5): 114.
［10］刘成梅，付桂 明，涂宗则，等. 百合多糖降血糖功能研究［J］. 食品科学，2002, 23(6): 113.
［11］赵国华，李志孝，陈宗道. 百合多糖的化学结构及抗肿瘤活性［J］. 食品与生物技术，2002, 21(1): 62.
［12］Manal M Shehata，王 璋. 百合中水溶性非淀粉多糖的分离与提纯［J］. 无锡轻工大学学报，2002, 21(5): 503.
［13］贺世洪，任凤莲，宋 鸽.秋水仙碱的二阶导数极谱测定［J］. 湘潭大学自然科学学报，2001, 23(4): 78.
［14］何纯莲，李谷才，任凤莲，等. 超临界流体萃取——高效液相色谱法测定百合中秋水仙碱［J］. 天然产物研究与开发，2003, 15(1): 5.
［15］李新社，王志兴. 溶剂提取和超临界流体萃取百合中的秋水仙碱［J］. 中南大学学报(自然科学版)，2004, 35(2): 244.
［16］郭朝晖，蒋生祥. 中药百合的研究和应用［J］. 中医药学报，2004, 32(3): 27.
［17］任凤莲，邱昌桂，连 琰. 百合总皂甙的提取工艺［J］. 中南大学学报(自然科学版)，2005, 36(1): 69.
［18］吉宏武，丁霄霖. 百合总皂苷定量测定方法的研究［J］. 林业化学与工业，2003, 23(4): 54.
［19］吉宏武，丁霄霖. 百合甾体皂苷元的气——质联用分析及其结构鉴定［J］. 无锡轻工大学学报，2003, 22(3): 84.
［20］刘成梅，付桂明，涂宗财，等. 百合多糖提取的影响因素研究［J］.食品科学，2002, 23(2): 87.
［21］滕利荣，孟庆繁，刘培源，等. 酶法提取百合多糖及其体外抗氧化活性［J］.吉林大学学报(理学版)，2003, 10(4): 538.
［22］杨林莎，李玉贤，李秋杰，等. 百合多糖提取、纯化工艺优选［J］.中医研究，2005, 18(1): 25.
［23］杨林莎，李玉贤，李明丽，等. 苯酚-硫酸比色法测定百合多糖的含量［J］.中国中医药信息杂志， 2004, 8(11): 704.
［24］杨华，阮振寰，姚 宏. 百合多糖的提取及蛋白含量测定［J］.美中国际创伤杂志，2005, 4(2): 53.
［25］孙丽华，周彦钢，盛 清，等. 百合活性多糖的分离纯化与鉴定［J］.浙江省医学科学院学报，2000, 6 (42): 27.
［26］何纯莲，向建南，伍伟青. 百合中秋水仙碱的分离应用研究［D］. 湖南大学硕士学位论文，2003, 10: 17, 32.
［27］李谷才，任凤莲. 超临界流体萃取百合中的秋水仙碱［D］. 中南大学硕士学位论文，2004, 09: 19, 35.
［28］刘成梅，万 茵，涂宗财，等. 百合多糖脱蛋白方法的研究［J］.食品科学，2002, 23(1): 89.2.3