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【摘要】 目的：采用高效液相色谱—蒸发光散射检测器，测定当归补血汤中黄芪甲苷的含量。方法：色谱柱：Diamonsil ODS??C18(250mm×4.6mm，5μm)分析柱；流动相：乙腈－水(32:68)；流速：0.6ml?min-1；柱温：35℃；载气流速：2.7 ml?min－1；ELSD检测器漂移管温度：100℃。结果：经配伍后黄芪甲苷含量有所增加。结论：试验为进一步阐明黄芪与当归配伍用药的科学内涵以及当归补血汤质量标准的建立提供了试验方法和科学依据。
【关键词】 当归补血汤；高效液相色谱—蒸发光散射检测器；黄芪甲苷
当归补血汤系中医经典名方，始载于李东垣的《内外伤辨惑论》，按黄芪：当归(5：1)组成，具补气生血等功效，被广泛应用于妇科、内科、外科等方面的病症。论文论文参考网黄芪甲苷为组方中的有效成分，且为药典中规定的黄芪质量评价指标成分，因此选择黄芪甲苷含量对当归补血汤进行研究［1-3］。
1 仪器与试药
Waters 600液相色谱分离系统，Agilent 1100自动进样器，Alltech ELSD??2000蒸发光散射检测器。
黄芪药材为膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge. 当归药材为当归Angelica sinensis(Oliv.)Diel，购于长春市宏检药材有限公司；乙腈为美国Fischer公司生产，色谱醇；其它试剂为分析醇；Milli??Q超纯水。黄芪甲苷对照品(批号0781??200210，供含量测定用)购自中国药品生物制品检定所。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备 分别取4组药材进行煎煮：黄芪15g组、黄芪15g配伍当归3g合煎组、当归3g组、黄芪15g与当归3g单煎合并组。依次加入10倍量、6倍量水，分别煎煮60min，滤过，合并滤液；浓缩定容至100ml，精密量取20ml，用水饱和正丁醇萃取4次，每次40ml，合并正丁醇液，蒸干，用甲醇定容到5ml。用0.45μm滤膜滤过，取续滤液即为供试品。
2.2 标准品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷标准品，加甲醇配成1.01 mg?ml-1的溶液，即得。
2.3 色谱条件 色谱柱：Diamonsil ODS??C18(250mm×4.6mm，5μm)分析柱；流动相:乙腈－水(32:68)；流速：0.6 ml?min－1；柱温：35℃；载气流速:2.7ml?min-1；ELSD检测器漂移管温度：100℃；进样量20μl，色谱图见图1。
图1 黄芪甲苷、黄芪、当归补血汤、当归的HPLC图（略）
2.4 方法学考察［4-8］
2.4.1 线性关系考察 取黄芪甲苷对照品溶液(1.01 mg?ml-1)，分别进样1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μl，记录峰面积，以黄芪甲苷进样量(μg)的常用对数为横坐标，峰面积的常用对数为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：lgy=481628lgX+317832，r=0.9997。结果表明，黄芪甲苷在1.01-20.2μg范围内线性关系良好。
2.4.2 稳定性考察 取同一供试品溶液，定时(1h，2h，4h，8h，12h)进行测定，进样各20μl，测定峰面积积分值分别为，5054367，4892365，4903698，5049963，5009430，RSD=1.6%，稳定性较好。
2.4.3 精密度试验 取同一对照品溶液，进样10μl，重复进样5次，测定峰面积积分值分别为5044367，5001365，5033698，5019963，5009430，RSD＝0.35%，精密度较好。
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2.4.4 重现性试验 精密称定同一组样品3份，按照2.1项下方法制备样品溶液，计算含量，结果分别为1.4485mg?g-1，1.4436mg?g-1，1.4512mg?g-1，RSD=0.27%。
2.4.5 加样回收率试验 精密称定已知黄芪甲苷含量为1.4485mg?g-1的同一组样品3份，每份各1.0g，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液(1.01mg?ml-1)1ml，按照2.1项下方法制备样品溶液，计算含量，结果分别为2.4123mg?g-1，2.4016mg?g-1，2.4112mg?g-1，平均加样回收率为95.04%，RSD=0.61%。
2.5 试验结果 按照2.3项色谱条件测得黄芪单煎黄芪甲苷含量为1.0 0211mg?g-1，黄芪：当归为5:1合煎组黄芪甲苷含量为1.4485mg?g－1，黄芪：当归为5:1单煎合并组黄芪甲苷含量为1.0230mg?g-1，当归单煎未检测到黄芪甲苷。
3 讨论
实验结果表明，黄芪：当归(5：1)单煎合并组中黄芪甲苷含量与黄芪单煎组基本相同，黄芪：当归(5：1)合煎组含量较黄芪单煎组有所升高。其原因可能为当归中的化学成分具有助溶性，使黄芪甲苷的溶出量增加。因此黄芪与当归配伍，有利于有效成分黄芪甲苷的溶出，这为传统的配伍理论提供了一定的科学依据。但是中药成分复杂，特别是经过配伍各化学成分之间会发生相互影响甚至变化，因此还需进行更加深入的研究［9-10］。
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