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【摘要】 目的比较不同产地防风多糖的含量。方法利用苯酚-硫酸法测定防风多糖的含量。结果安国的防风多糖含量最高为2.53%，围场的防风多糖含量最低为1.57%。结论不同产地防风药材中多糖的含量不同，可能与产地、采摘时间有关，此可供防风的进一步开发利用参考。
【关键词】 防风； 多糖； 苯酚-硫酸显色法
Abstract：ObjectiveTo compare polysaccharide content of Radix Saposhnikoviae from different areas. MethodsThe polysaccharide content Radix Saposhnikoviae was detected with Phenol-Sulphate colorimetry. ResultsThe polysaccharide content of Radix Saposhnikoviae in Anguo ws the highest with 2.53%, in habitat Weichang was the lowest with 1.57%.ConclusionThe difference of polysaccharide content in Radix Saposhnikoviae may lie on its respective producing area and picking time,which offers helpful preference to further explotiation of Radix Saposhnikoviae.
Key words：Radix Saposhnikoviae; Polysaccharides; Phenol-Sulphate colorimetry
防风为伞形科植物防风Saposhnikovia divaricata (Turcz.)Schischk.未抽花茎植株的干燥根，入药始见于我国第一部中药专著《神农本草经》，具有解表祛风、胜湿止痉的功能，主要分布在我国的东北，华北等地［1，2］。论文学术科研网防风中主要的化学成分有挥发油、色原酮、香豆素、有机酸、多糖等［3］。研究证明防风多糖具有明显的体内抗肿瘤作用［4，5］。本实验利用苯酚-硫酸法测定了不同产地药材防风多糖含量，为防风药材的开发应用提供基础数据。
1 仪器与药品
1.1 仪器756紫外可见光分光光度计（上海分析仪器总厂）；真空干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；MP1100B型电子天平（上海精科天平厂）；分析天平（日本）。
1.2 药品无水葡萄糖（中国药品生物制品检定所）；硫酸（天津化学试剂有限公司）；苯酚（分析纯）；无水乙醇（天津化学试剂有限公司）；三蒸水（实验室自制）；防风药材购自张家口、昌平、安国和围场，经本院中医系马淑兰教授鉴定；防风对照药材购自中国药品生物制品检定所。
2 方法
2.1 防风多糖的提取精密称取不同产地已粉碎、真空干燥的防风药材450.0 g，加入1 000 ml无水乙醇回流提取2 h，以除去单糖及其它醇溶性成分，过滤，滤渣干燥，加入1 000 ml三蒸水回流提取2h，趁热过滤，滤渣再加入1 000 ml三蒸水回流提取2h，合并两次滤液，减压浓缩，12 000 r/min 离心20 min，上清四倍体积无水乙醇沉淀静置过夜，抽滤，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤，真空干燥即得防风多糖。
2.2 5.0%苯酚标准液的制备取苯酚100 g，加铝片0.1 g和碳酸氢钠0. 05 g，常压蒸馏，收集180～182℃馏分称取该馏分5 g，置100ml容量瓶中，加三蒸水稀释至刻度，摇匀后滤过至棕色试剂瓶中，得5%苯酚溶液，置4℃冰箱备用。
2.3 葡萄糖标准液的制备精密称取105℃真空干燥的葡萄糖标准品50 mg，置50 ml容量瓶中，加三蒸水定容至刻度，即得1.00 mg/ml的葡萄糖标准液。
2.4 样品溶液的制备精密称取不同产地已粉碎、真空干燥的防风药材0.50 g，加入100 ml无水乙醇回流提取2 h，过滤，滤渣干燥，加入100 ml三蒸水回流提取2 h，趁热过滤，滤渣再加入100 ml三蒸水回流提取2 h，合并两次滤液，减压浓缩，12 000 r/min 离心20 min，上清四倍体积无水乙醇沉淀静置过夜，抽滤，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、石油醚洗涤，真空干燥后在100 ml量 量瓶中以蒸馏水定容，作为样品溶液。
2.5 标准曲线的绘制精确移取葡萄糖标准液10，15，20，25，30，35 μl，分别加入990，985，980，975，970，965 μl三蒸水，加入5%苯酚溶液500 μl，迅速加入浓硫酸2.5 ml，静置20 min，以试剂空白为参比，在490 nm波长下测D值，得回归方程：A=0.061C-0.000，r=0.997。
2.6 换算因素测定精密称取真空干燥至恒重的防风多糖10 mg，置于250 ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作贮备液。精密吸取贮备液0.3 ml按“2.5”项下的方法测定吸光度。另精取葡萄糖标准液0.3 ml同法操作，求出防风多糖中的葡萄糖含量。按下式计算换算因素f结果。f=2.47（f=多糖含量/多糖溶液中的葡萄糖含量×稀释倍数）。
2.7 精密度实验取同一样品溶液，重复测定吸光度6次，RSD为1.06%。结果表明精密度良好。
2.8 重现性实验取同一批样品溶液6份，平行测定吸光度，RSD为1.43%，表明重现性良好。
2.9 稳定性实验取样品溶液，照样品测定方法操作，每隔1h测定吸光度值，连续8 h，结果吸光度基本无变化，表明样品在8h内稳定性良好。
2.10 加样回收率实验分别精密吸取对照品溶液10，15，20，25，30 μl，各加入样品溶液10 μl，按照样品测定方法测定吸光度，代入回归方程计算，结果平均回收率为98.65%。RSD=1.47%。
2.11 样品含量测定精取防风多糖样品液1.5 ml按“2.5”项下操作，测定吸光度，按下列公式计算样品中的多糖含量，重复5次，取平均值。
多糖含量（%）=C×D×f×V/W×100%
C：供试品中葡萄糖浓度(μg/ml)；D：供试品的稀释因素；f：换算因素；V：供试品体积（ml）；W：供试品的重量（μg）。
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3 结果
不同产地的防风药材按“2.4”项下制备样品溶液，按“2.11”项下测定含量。结果见表1。表1 不同产地防风中多糖的含量
4 讨论
不同产地防风药材中均含有多糖，对照药材防风多糖含量为2.61%，安国的防风多糖含量最高为2.53%，围场的防风多糖含量最少为1.57%，可能与药材的产地、采摘时间有关。
研究表明中药多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗辐射、降血糖、降血脂、保肝等多种功能［6～9］，其中中药多糖的免疫调节活性及抗肿瘤作用备受关注，是中药多糖研究的中心课题。本实验用苯酚-硫酸法测定了防风中的多糖含量，为防风的进一步开发利用奠定了基础。
【参考文献】
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