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【摘要】 目的：建立蒙药那如3味丸中新乌头碱的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法测定新乌头碱的含量。色谱柱为Extend??C18(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-0.3mol/L三乙胺(65:35)，流速为0.8ml/min，检测波长为235nm，柱温为35℃。结果：经过方法学考察，新乌头碱含量测定方法具有一定的专属性、准确性、重现性和可行性，样品在0.35-1.75μg范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率为99.96%，RSD为0.87%。结论：本方法简便、准确、分离效果好、线性范围宽、灵敏度高，可用于本品的质量控制。论文学术科研网
【关键词】 高效液相色谱法；那如3味丸；新乌头碱
蒙药那如3味丸由诃子、制草乌、荜茇组成，具消“粘”，消肿，燥“协日乌素”，祛风、止痛、散寒 的功效［1］。制草乌中二萜类双酯型乌头碱的毒性很强，人口服0.2mg即可出现恶心、呕吐、头晕、眼花、脉缓、呼吸困难、神志不清、心律紊乱等中毒现象［2-3］，为了保证临床用药安全有效，我们用HPLC法测定了那如3味丸中新乌头碱含量。
1 仪器和试药
Waters 2695高效液相色谱仪，包括二级管阵列检测器、进样器、柱温箱；新乌头碱对照品(批号：0799??200404，供含量测定用，购于中国药品生物制品检定所)；那如3味丸(内蒙古民族大学附属医院制剂室提供)；所用试剂甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Extend??C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇??0.3 mol/L三乙胺(65：35)；流速：0.8ml/min；检测波长：235nm；柱温：35℃，色谱详见图1。
2.2 对照品溶液的制备 准确称取新乌头碱对照品2.5mg置于5ml容量瓶中，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，即得。
图1 高效液相色谱（略）
2.3 供试品溶液的制备 称取蒙药那如3味丸5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，用10%氨水湿润20min，精密加乙醚60ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，再称定重量，用乙醚补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
阴性溶液的制备：按处方比例及制备工艺，制备缺制草乌的阴性样品，同供试品溶液方法制备。
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2.4 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0μl注入液相色谱仪，测定其峰面积，以峰面积值(Y)作纵坐标，进样量(X)作横坐标，绘制标准曲线，并进行线性回归，得回归方程为：y=1028.3X-12.59，ｒ=0.9992；结果表明：在0.35～1.75μg范围内，新乌头碱的峰面积与进样量有良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，连续进样5次，依法测定，记录峰面积积分值，结果精密度良好，RSD=1.12％。
2.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液各10μl，每隔2h分别注入液相色谱仪，依法测定，以新乌头碱峰面积为指标，测定其稳定性，结果在8h内峰面积无明显变化，RSD=1.09%。表明仪器、方法的稳定性较好。
2.7 重现性试验 取同一批号蒙药那如3味丸5份，按供试品溶液项下制备，依法独立测定，计算样品含量，以考察本法的重现性，结果其RSD为1.48％，表明重现性很好。
2.8 加样回收率试验 精密称取已知新乌头碱含量的供试品6份，每份分别加入新乌头碱对照品适量，按“2.3”项下方法进行制备，依法测定，计算平均加样回收率为99.96%，RSD=0.87%，表明该方法准确性好，方法可行。
2.9 样品测定 按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，根据新乌头碱的线性回归方程，对蒙药那如3味丸提取液中的新乌头碱成分含量进行测定，三批样品平均值为0.386mg/g。
3 小结
采用高效液相色谱法测定蒙药那如3味丸中新乌头碱的含量，新乌头碱在0.35～1.75μg范围内呈良好的线性关系，加样平均回收率为99.96%，RSD为0.87%。本法简单，快速，结果准确，可作为该制剂的质量控制方法。
【参考文献】
［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药品标准［M］.蒙药分册.北京:人民卫生出版社，1998.98.
［2］曹志红，赵 远.四逆汤中总乌头碱含量的测定［J］.中国中医急症，2003，12(6):559.
［3］李 飞，刘 曦，杨 蕾.乌头蜜制的工艺研究及主要生物碱的含量测定［J］.北京中医药大学学报，2003，26(6):57.