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作者：高伟，王晓娟，刘翊，杜连祥
【摘要】 目的建立分光光度法测定降糖复方中药提取液中总多糖的含量。方法紫外分光光度法，苯酚－硫酸法。结果该方法的线性范围为5～40 μg/ml，r=0.999 3，平均回收率为99.36％，RSD=3.15％。结论该方法简便易行，重现性良好。
【关键词】 复方降糖中药提取液； 总多糖； 紫外分光光度法； 含量测定
由黄芪、荔枝核、山楂叶、银合欢种子按一定的比例混合，经一定的提取工艺加工得到的提取液，经药理实验表明，具有很好的降低血糖、调节血脂的作用。论文学术科研网多糖为其主要有效成分之一。本文采用紫外分光光度法、苯酚－硫酸法对该提取液中的总多糖进行含量测定，为其质量标准的研究与指标的制定提供实验依据。结果表明本法简便灵敏快速易行，可用于控制该产品的质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器 核酸蛋白分析仪由广州雷得生物技术有限公司生产。
1.2 试药 降糖复方中药提取液由本院自行制作；葡萄糖标准品：中国药品生物制品检验所出品；浓硫酸、苯酚、乙醇均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 葡萄糖标准品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖标准品5 mg，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每毫升中含无水葡萄糖0.05 mg的溶液作为标准品溶液。
2.2 供试品溶液的制备 降糖复方中药提取液的浓度为生药50 g/100 ml，精密移取降糖复方中药提取液2.5 ml至离心管中，3 500 r/min离心5 min，收集上清液至离心管中，加入10ml无水乙醇，3 500 r/min离心10 min，倾去上清液，所得沉淀水浴蒸干，加蒸馏水10 ml，水浴30 min，转移至25 ml容量瓶中，定容，备用。
2.3 最大吸收波长的确定［1］分别精密移取葡萄糖标准品溶液30 μl及供试品溶液30 μl置于10 ml具塞试管中，各加入蒸馏水至1ml，然后各加入5%的苯酚溶液0.6 ml，摇匀，迅速加入浓硫酸3.6 ml，振摇5 min，沸水浴中加热15 min，冰水浴中冷却30 min，取出。以蒸馏水同上操作制备空白溶液。用核酸蛋白分析仪在200～700 nm范围内扫描，由扫描结果可知，葡萄糖标准品和供试品的最大吸收波长均为485 nm。
2.4 标准曲线的制备 精密移取标准品溶液0.0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 ml分别置于10 ml具塞试管中，加水至1 ml，分别加入5％的苯酚溶液0.6 ml，迅速加入浓硫酸3.6 ml，振摇5 min，沸水浴15 min，冰水浴30 min，取出，以第1份为空白，于核酸蛋白分析仪系统中，在485 nm处测定吸光度，结果见表1。
表1 标准曲线的制备（略）
上述实验数据经过计算得回归方程：A=11.861C+0.000 8，r =0.999 3，结果表明葡萄糖浓度在5～40 μg/ml范围内线性关系良好。
2.5 稳定性实验按“2.3”项方法操作，每隔30 min对同一供试品溶液测定吸光度一次，结果表明，供试液在3 h内显色稳定，见表2。
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表2 稳定性实验结果（略）
2.6 重现性实验 同一批样品，各精密吸取2.5 ml共5份，制备供试品溶液，各精密吸取供试品溶液30 μl，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度分别为0.453，0.479，0.472，0.468，0.486，RSD为2.65%（n=5）。说明本方法重现性良好。
2.7 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液30 μl共5份，照标准曲线的制备项下方法测定吸光度分别为0.466，0.452，0.463，0.459，0.471，RSD为1.56％（n=5）。
2.8 加样回收率实验 在已知含量的同一批样品中，吸取样品溶液约1ml共5份，分别精密加入一定量的葡萄糖标准品，制备供试品溶液，照标准曲线的制备项下方法显色并测定吸光度，计算回收率，回收率（%）＝（实验测值－样品所含被测成分量）/加入纯品量×100％［2］，结果测得平均回收率为99.36％，RSD=3.15％（n=5）。结果见表3。
表3 多糖加样回收率测定（略）
2.9 样品含量测定 精密移取3批样品溶液2.5 ml，制备供试品溶液，精密移取30 μl置具塞试管中，加蒸馏水补充至1 ml，同标准曲线的制备项下操作， ，在485 nm处测定吸光度，分别为0.447，0.483，0.469，根据回归方程计算，以从提取液中所含的生药中提取的总多糖百分比计即为2.52%，2.72%，2.60%。结果表明浓度为生药50 g/100 ml的样品，总多糖含量为1.305 g/100 ml。
3 讨论
本文采用苯酚－硫酸显色法，以葡萄糖计算测定复方中药提取液中总多糖的含量。苯酚－硫酸比色法是由于糖类与苯酚－硫酸反应生成橙黄色产物，与糖含量成正比，适用于单糖、寡糖、多糖等多种糖类的测定［3］。多糖在硫酸作用下水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，然后用分光光度法测定其含量［4，5］。通过线性关系考察、稳定性、重现性、精密度和加样回收率实验及样品含量测定结果，表明本方法简便快捷，灵敏度高，可作为该产品质量的检测与控制方法。
【参考文献】
?［1］ 张家富,孟 楣.紫外分光光度法测定糖肾康颗粒中总多糖的含量［J］.安徽中医学院学报,2005,24（4）：48.
［2］ 丰朝霞,张 鸿.分光光度法测定茯苓中多糖总糖含量［J］. 时珍国医国药,2000,11（2）:109.
［3］ 周文兰,童列波. 苯酚-硫酸法测定康克胶囊中多糖含量［J］.时珍国医国药,2001,12（7）：595.
［4］ 北京医学院.中草药成分化学［M］.北京:人民卫生出版社,1981∶185.
［5］ 李小凤,程和凤. 广佛手中总多糖含量的分光光度法测定［J］.中成药,2004,10（26）:附5.