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作者：覃容贵 吴建伟 国果 付萍
【摘要】 目的观察蝇蛆壳聚糖的急性毒性反应。方法蝇蛆壳聚糖以最大浓度及最大给药体积的药液灌胃连续给药3次。连续观察14 d，记录小鼠毒副反应情况。蝇蛆壳聚糖腹腔注射给药1次，连续观察14 d，记录小鼠毒副反应情况。结果观察14 d,灌胃给药全部动物健存，小鼠体重与空白对照组差异无显著性，未见任何毒性反应。论文学术科研网计算蝇蛆壳聚糖最大给药量为2 700 mg/ kg体重，相当于成人日用量的67.5倍。腹腔注射给药亦未见任何毒性反应。结论蝇蛆壳聚糖毒性较小。
【关键词】 蝇蛆壳聚糖 小鼠 急性毒性
甲壳素是地球上除纤维素之外最丰富的天然高分子聚合物。壳聚糖是甲壳素的脱乙酰化产物，是一种具有重要开发价值的天然多糖物质。壳聚糖以其独有的特性日益成为全世界研究的热点，在医学、生物工程、化工、食品、化妆品、农业、环保等领域得到广泛深入的研究［1］。昆虫甲壳素也是甲壳素的重要来源之一。研究表明，干蛆中甲壳素的含量高于虾蟹中甲壳素的含量，因此更具有可利用价值［2］。本实验通过观察对实验动物一次给药后所产生的毒性症状及其程度，出现和消失的时间，死亡的发生率并计算出其最大给药量，从而推测蝇蛆壳聚糖对人的急性毒性的强弱。
1 材料与仪器
1.1 药物蝇蛆壳聚糖，自制。
1.2 动物 昆明种小鼠,清洁级,体重18～22 g，由贵阳医学院实验动物中心提供。
1.3 器材 电子秤、量筒、1 ml注射器、灌胃针。
1.4 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件，各组数据均以±s表示，各项指标组间差异的显著性比较采用Independent Samples T Test。
2 方法
2.1 灌胃的最大耐受量实验
2.1.1 动物分组 取小鼠40只,体重18～22 g，按体重随机分成两组，即蝇蛆壳聚糖给药组和蒸馏水对照组，每组20只，雌雄各半。以每笼5只饲养。
2.1.2 药物配制 蝇蛆壳聚糖临用前用蒸馏水稀释至所需浓度，以其能保持较好的流动性及可操作性，配制最大浓度为:33 mg/ml。
2.1.3 给药途径和容积 按每10 g体重0.3 ml药液，分别于上午8时、10时和12时灌胃给药，共连续给药3次。累计给药剂量为2700 mg/kg。给药前禁食12 h，正常饮水。给药量计算方法如下。
单次灌胃容积(ml)=〔动物体重(g) ×0.4〕 /10
单次灌入的药量(g)=单次灌胃容积(ml)×0.03
相当于人用量的倍数=(灌入的总药量×50×1 000)/(动物体重×22)
小鼠的最大耐受量=每只小鼠的耐受药量小鼠平均体重(20 g)×成人平均体重(50 000 g)成人每日用量
2.1.4 观察毒性反应 给药前后应观察体重、进食、进水的情况，密切观察异常毒性症状，观察症状包括：①行为活动：不安定、多动、发声；②神经系统反应：举尾、震颤、痉挛、运动失调、姿态异常；③自主神经系统反应：眼球突出、流涎、流泪、排尿、下泻、竖毛、皮肤变色、呼吸；④死亡。每日记录体重、毒性反应和死亡情况，在给药第1天每隔30 min到1 h观察1次,以后每天观察并称体重1次，连续观察14 d，记录动物毒性反应及死亡分布情况。以体重变化、反应情况综合评价实验结果，以不产生死亡的最大剂量为最大耐受量，推算出相当于临床用药量的倍数。
2.2 腹腔注射的急性毒性实验取20只小鼠, 体重18～22 g，雌雄各半。实验前12 h 禁食，不禁水，用配制浓度为30 mg/ ml的壳聚糖药液进行腹腔注射，每只小鼠注射量为0.3 ml(相当于900 mg/kg)。给药后即刻观察动物的反应情况，包括动物外观、行为活动、精神状态、食欲、大小便及其颜色、皮毛、鼻、眼、口有无异常分泌物以及死亡情况。在给药第1天每隔30 min到1h观察1次，以后每天观察，连续观察14 d，记录动物毒性反应及死亡分布情况。
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3 结果
3.1 灌胃的最大耐受量实验
3.1.1 存活情况20只小鼠壳聚糖药液按900 mg/kg剂量灌胃后，无一死亡，继续观察14 d，全部存活。
3.1.2 体重变化药后14 d内小鼠活动、进食，排泄均正常，生长良好，毛色光亮，体重增加，无死亡。其平均体重均随实验时间的延长而增加，与相应时间的空白对照组相比，差异无显著性意 意义(P>0.05) 。见表1和图1。
表1 小鼠经口服蝇蛆壳聚糖最大给药量后体重变化情况（略）
与空白对照组比较，▲P>0.05；n=10
3.1.3 对脏器的影响观察期结束处死动物，尸体肉眼观察,壳聚糖给药组和对照组小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器外形、大小正常，切面均未见异常变化。
3.1.4 最大耐受量测定 20只小鼠各经壳聚糖药液3次灌胃总量为54 mg, 相当于临床成年人给药口服剂量的67.5 倍。成年人的拟口服用量为2 g/d。按公式计算:
小鼠的最大耐受量=每只小鼠的耐受药量小鼠平均体重(20 g)×成人平均体重(50 000 g)成人每日用量=(0.054/20)×(50 000/2)=67.5
3.1.5 毒副作用20只蝇蛆壳聚糖灌胃小鼠无1例死亡, 全部存活, 且无明显毒副反应。蝇蛆壳聚糖最大给药剂量可达2 700 mg/kg。
3.2 腹腔注射的急性毒性实验
3.2.1 存活情况20只小鼠壳聚糖药液按900 mg/kg剂量腹腔注射后, 无一死亡, 继续观察14 d, 全部存活。
3.2.2 对生活及生长的影响药后14 d内小鼠活动、进食,排泄均正常,生长良好,毛色光亮,无死亡。
图1 小鼠经口服蝇蛆壳聚糖最大给药量后体重变化（略）
3.2.3 对脏器的影响观察期结束处死动物，尸体肉眼观察，壳聚糖给药组小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器外形、大小正常，切面均未见异常变化。
3.2.4 毒副作用腹腔注射蝇蛆壳聚糖，每只小鼠注射量为0.3 ml(相当于一次注射给药量900 mg/kg)无一例死亡, 全部存活, 且无明显毒副反应。
4 小结
蝇蛆壳聚糖的经口急性毒性实验中，按最高浓度(每毫升溶液中含有蝇蛆壳聚糖30 mg)及小鼠最大的灌胃容量(0.3 ml/10 g)计算用药剂量为2 700 mg /kg，相当于成人每日常用量的67.5倍以上。连续观察14 d，药后14 d内小鼠全部存活，活动、进食、排泄均正常，生长良好，毛色光亮，体重增加，鼻、眼、口腔无异常分泌物。解剖动物，肉眼观察重要脏器，未出现明显的病理学改变，故用药后未见急性毒性反应。
蝇蛆壳聚糖的腹腔注射急性毒性实验中，按900 mg/kg腹腔注射给药，药后14 d内小鼠活动、进食,排泄均正常，生长良好，毛色光亮,无死亡。解剖动物，肉眼观察重要脏器，未出现明显的病理学改变。
急性毒性实验结果表明，蝇蛆壳聚糖无急性毒性作用。成年人的拟口服用量为2 g/d是安全的。
【参考文献】
［1］ 何乃普，宋鹏飞，王荣民，等.甲壳素／壳聚糖及其衍生物抗菌、抗肿瘤活性研究进展［J］.高分子通报，2004，3：14.
［2］ 徐宁彤，曲琪环，周玉岩，等.从蝇蛆中提取壳聚糖的研究［J］.饲料博览，2006，7：32.